1、磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-Kinase,P13K)是細(xì)胞信號(hào)通路中一大類脂激酶家族,P13K/AKT信號(hào)通路的活化在很多類型的腫瘤中都會(huì)導(dǎo)致異常的細(xì)胞增生。PIK3CA基因編碼ⅠA類P13K催化亞基p100α,研究發(fā)現(xiàn)它在多種人類腫瘤中發(fā)生功能性突變,導(dǎo)致P13K激酶活性增加,進(jìn)而導(dǎo)致整個(gè)信號(hào)通路活化,因此PIK3CA基因突變被認(rèn)為在腫瘤治療中有預(yù)測(cè)預(yù)后功能,并可以作為藥物開發(fā)的靶點(diǎn)。隨著越來越多P

2、13K信號(hào)通路靶向抑制劑的開發(fā),對(duì)于PIK3CA基因突變的檢測(cè)變得越來越重要。本研究利用分子生物學(xué)的方法,基于實(shí)時(shí)PCR平臺(tái)建立檢測(cè)體系檢測(cè)PIK3CA基因外顯子9及外顯子20上的突變,為PIK3CA基因突變的檢測(cè)提供新策略。
　　 第一章,首先介紹了P13K/AKT信號(hào)通路在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,隨后介紹了PIK3CA基因以及其突變的分子生物學(xué)意義和臨床意義,最后介紹了PIK3CA基因突變的檢測(cè)方法并提出了本研究所開發(fā)的兩種新

3、策略。
　　 第二章,介紹了改良分子信標(biāo)探針熔解曲線分析方法的建立,該方法相較于直接測(cè)序法提高了突變檢測(cè)靈敏度,對(duì)于PIK3CA基因突變的檢測(cè)較全面,且具有快速,簡(jiǎn)便,易于實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)的特點(diǎn),并且避免了22q11.2同源基因(98％)的擴(kuò)增使得檢測(cè)更準(zhǔn)確。本檢測(cè)體系對(duì)于突變DNA的選擇性可達(dá)55～10％,靈敏度可達(dá)30拷貝/反應(yīng),體系特異性及重復(fù)性良好。在對(duì)122份腫瘤組織標(biāo)本檢測(cè)中結(jié)直腸癌標(biāo)本檢出突變8份(8/94.8.5％

4、),乳腺癌標(biāo)本檢出突變11份(11/28,39.3％),測(cè)序驗(yàn)證中除3份突變標(biāo)本測(cè)序?yàn)橐吧馄溆嗑c測(cè)序結(jié)果一致,說明本檢測(cè)方法較測(cè)序更為靈敏。
　　 第三章,針對(duì)3個(gè)熱點(diǎn)突變建立單管多重ARMS探針熔解曲線分析方法,該方法的特異性.ARMS引物對(duì)突變起到富集作用,提高了野生背景下的突變檢測(cè)靈敏度,與前章所介紹的方法相互補(bǔ)充,相互驗(yàn)證。本體系對(duì)于突變DNA的選擇性可達(dá)0.5％,靈敏度可達(dá)30拷貝/反應(yīng),體系特異性及重復(fù)性良好。在