1、背景和目的:α7尼古丁受體（α7-nAChRs）參與眾多重要生理過程，包括調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、介導(dǎo)突觸后興奮反應(yīng)、長時(shí)程增強(qiáng)以及認(rèn)知功能等。研究表明腦內(nèi)海馬區(qū)有大量α7-nAChRs表達(dá)，且接受膽堿能纖維支配。但關(guān)于α7-nAChRs受體本身的功能特點(diǎn)的研究仍很不充分，值得進(jìn)一步深入和拓展，特別是其他神經(jīng)遞質(zhì)（如谷氨酸等）對α7-nAChRs受體功能的影響仍有待進(jìn)一步研究。
　　考慮到課題組后續(xù)可能開展的相關(guān)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究，本工作

2、主要在昆明小鼠（Kunming Mice，KM）海馬腦片CA1區(qū)中間神經(jīng)元上對α7-nAChRs功能進(jìn)行研究，并與常用的Sprague-Dawley（SD）大鼠的一些相關(guān)研究進(jìn)行比較。本研究首先成功建立紅外可視腦片膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，之后較系統(tǒng)地觀察了小鼠海馬腦片CA1區(qū)中間神經(jīng)元α7-nAChRs的電生理特性和藥理學(xué)特性，并同大鼠的一些相關(guān)結(jié)果作比較分析；以此為基礎(chǔ)，結(jié)合形態(tài)學(xué)特點(diǎn)對小鼠海馬CA1區(qū)的α7-nAChRs進(jìn)行初步分類，

3、并嘗試探討了谷氨酸（glutamic acid，Glu）對反復(fù)暴露于配體刺激的海馬腦片CA1區(qū)α7-nAChRs功能的影響。
　　方法:應(yīng)用紅外微分干涉相差顯微鏡聯(lián)合腦片膜片鉗記錄技術(shù)，結(jié)合藥理學(xué)手段，在急性制備的健康昆明小鼠和SD大鼠海馬腦片CA1神經(jīng)元上，以氯化膽堿為激動(dòng)劑，記錄氯化膽堿誘發(fā)的全細(xì)胞電流反應(yīng)，以此來反映α7-nAChRs的功能特點(diǎn)。高濃度的氯化膽堿（10mM）可由pico-spritzer III控制，通過特制

4、玻璃微電極尖端瞬間噴射到神經(jīng)元細(xì)胞膜而又不影響全細(xì)胞電流記錄的高阻封接狀態(tài)。特殊藥物如PNU-120596（一種α7-nAChRs變構(gòu)調(diào)節(jié)劑）、Glu等對α7-nAChRs功能的影響則可通過由pico-spritzer III控制的theta（θ）微玻管尖端施加到細(xì)胞上：θ管的一側(cè)充滿氯化膽堿（10mM），另一側(cè)則同時(shí)充滿氯化膽堿（10mM）+影響藥物。其他藥物如TTX（河豚毒素，鈉通道阻斷劑）則通過持續(xù)灌流的胞外液體作用到細(xì)胞上。數(shù)據(jù)

5、處理采用Clampfit10.4+Excel VBA自編程輔助的方法，實(shí)現(xiàn)對全細(xì)胞記錄結(jié)果的半自動(dòng)規(guī)范化處理，并以此為基礎(chǔ)，建立開放式可擴(kuò)展數(shù)據(jù)庫，為后續(xù)相關(guān)研究打下良好基礎(chǔ)。
　　結(jié)果:
　　1）適合實(shí)驗(yàn)的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元在紅外微分干涉相差顯微鏡下結(jié)構(gòu)清晰，外觀光澤度好、立體感強(qiáng)且具有明顯突起。
　　2）噴射氯化膽堿（10mM，100ms）可誘發(fā)出一快速激活和迅速失敏的內(nèi)向全細(xì)胞電流，且該反應(yīng)能被10nM的MLA（

6、α7-nAChRs的特異性阻斷劑）完全阻斷，2μM的PNU-120596共同作用可增加該電流的幅度并延長反應(yīng)時(shí)間（灌流作用）。
　　3）固定氯化膽堿的作用時(shí)間（100ms），改變前后兩噴藥時(shí)間間隔，發(fā)現(xiàn)隨著間隔時(shí)間的延長，第2次刺激的反應(yīng)逐漸恢復(fù)；當(dāng)間隔約80s時(shí)，第一次刺激對第2次刺激的反應(yīng)基本無影響。
　　4）固定氯化膽堿的噴藥間隔為80s，改變噴藥時(shí)長，發(fā)現(xiàn)噴藥時(shí)長在50-150ms的范圍內(nèi)反應(yīng)的波形接近，幅度大且差別

7、不大。
　　5）統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，小鼠和SD大鼠海馬CA1神經(jīng)元在靜息膜電位、放電頻率（刺激電流60　　6）外源性Glu（1mM，1s）預(yù)先激活谷氨酸受體可明顯增強(qiáng)膽堿誘發(fā)的電流反應(yīng)幅度，反應(yīng)時(shí)間也明顯

8、延長。
　　結(jié)論:
　　我們已有的結(jié)果表明：
　　1）海馬腦片CA1區(qū)神經(jīng)元α7-nAChRs激活的膜片鉗全細(xì)胞電流記錄方法成功建立，可對α7-nAChRs功能進(jìn)行定量研究。
　　2）所選用的激活α7-nAChRs的氯化膽堿的噴藥時(shí)長（100ms）和間隔時(shí)間（80s）是合適的，可作為基本的實(shí)驗(yàn)條件。
　　3）10nM的MLA可阻斷α7-nAChRs的反應(yīng)，而2μM的PNU-120596可增強(qiáng)其反應(yīng)幅度并延長