1、【目的】口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，口腔癌患者的5年生存率一直為50％左右，大部分患者多因腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致死亡。伴隨著全基因組和轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的發(fā)展，長鏈非編碼RNA日益受到關(guān)注，許多研究已經(jīng)表明LncRNA(Long non-coding RNA)不僅僅是從DNA到蛋白質(zhì)之間的中間產(chǎn)物，而且很多時候是作為一個具有細(xì)胞調(diào)節(jié)功能的重要角色，參與到生物生長發(fā)育的過程中。因此，研究口腔癌侵襲相關(guān)基因是目前的熱點問題。大量

2、的研究表明， LncRNA的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但目前的研究尚屬對UCA1在口腔中組織形態(tài)學(xué)的研究，而對其在口腔癌中的具體分子機制仍未涉及。因此，對 LncRNA RNA UCA1(urothelial cancer associated1)對口腔癌細(xì)胞系Scc15和Cal27生物學(xué)功能的一些影響進行探討，為口腔鱗癌早期診斷、治療，研制新的基因靶向藥物提供重要的實驗線索和依據(jù)。
　　【方法】以Scc15和Cal27

3、口腔鱗癌細(xì)胞系為研究對象，通過將UCA1-siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞中，探討沉默LncRNA RNA UCA1后對細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響。采用qRT-PCR方法驗證UCA1-siRNA的干擾效果；通過Western Blot檢測兩組中MMP-9蛋白的表達(dá)水平；運用劃痕實驗及Transwell實驗研究兩組細(xì)胞侵襲及遷移能力的改變；通過CCK-8實驗、Hoechst33258染色和流式細(xì)胞學(xué)分析檢測其細(xì)胞增殖、凋亡的情況；采用細(xì)胞免疫熒光實驗檢測上

4、述兩組細(xì)胞中β-catenin蛋白的改變。所得試驗數(shù)據(jù)以-x±S-x表示，并采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗和卡方檢驗分析。
　　【結(jié)果】qRT-PCR結(jié)果顯示：與control組相比，Scc15細(xì)胞干擾組UCA1表達(dá)水平下降近90%，而Cal27細(xì)胞干擾組下降值為85。Western Blot檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：兩組細(xì)胞干擾組中MMP-9蛋白表達(dá)水平均較control組下降。劃痕實驗結(jié)果顯示：在劃痕24 h后，干擾組較contr

5、ol-siRNA組劃痕遷移細(xì)胞的數(shù)量及劃痕愈合的速度明顯下降。Transwell遷移實驗結(jié)果顯示：兩組細(xì)胞control-siRNA組穿過小室的細(xì)胞數(shù)目顯著高于干擾組，Scc15對照組與干擾組遷移與侵襲穿膜細(xì)胞分別為437.2±54.75個（n=5）和145.8±23.31個(n=5)；Cal27的對照組與干擾組遷移穿膜細(xì)胞分別為719.2±92.36個（ n=5）和208.0±25.58個（ n=5）。Transwell侵襲實驗結(jié)果顯

6、示：兩組細(xì)胞control-siRNA組穿過小室的細(xì)胞數(shù)目顯著高于干擾組，Scc15對照組與干擾組遷移與侵襲穿膜細(xì)胞分別為437.2±54.75個（ n=5）和145.8±23.31個(n=5)；Cal27的對照組與干擾組侵襲穿膜細(xì)胞分別為363.4±45.96個和164.8±24.68個(n=5)。CCK-8實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)：隨著細(xì)胞生長時間的延長，Scc15和Cal27細(xì)胞干擾組與control-siRNA組比較細(xì)胞增殖能力下降。Hot

7、chest33258染色結(jié)果顯示，兩組細(xì)胞干擾組與control-siRNA組比較，凋亡的細(xì)胞均明顯較多。流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：兩組細(xì)胞的干擾組較control-siRNA對照凋亡率分別為18.54%和1.45%（Scc15，p=0.0175),11.24%和4.43%（Cal27， p=0.0019)。細(xì)胞免疫熒光實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組細(xì)胞的干擾組胞核中的β-catenin蛋白從胞核中移出至胞漿，并且總的β-catenin蛋白在細(xì)胞中的