1、研究目的：旨在建立人類口腔鱗狀細(xì)胞癌 (oral squamous cell carcinoma，OSCC)細(xì)胞系，確定其組織來(lái)源，并研究姜黃素對(duì)鱗癌細(xì)胞的相關(guān)毒性作用，對(duì)作用后的細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)周期、核轉(zhuǎn)錄因子蛋白及細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)等進(jìn)行一系列生物學(xué)特性檢測(cè)。 研究方法：①原代培養(yǎng)消化法將病理確診的口腔鱗癌組織經(jīng)胰蛋白酶、螯合劑(EDTA)作用，分散成單細(xì)胞懸液，加入含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置5％CO<,

2、2>、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育；②倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)；③細(xì)胞類型鑒定免疫組織化學(xué)法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的CD44表達(dá)情況，以確定其組織和細(xì)胞來(lái)源；④將不同濃度的姜黃素加入處于生長(zhǎng)指數(shù)期的鱗癌細(xì)胞中，作用24-48小時(shí)后檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的相關(guān)影響，包括細(xì)胞毒性作用、細(xì)胞形態(tài)變化、凋亡、生長(zhǎng)周期及核轉(zhuǎn)錄因子蛋白、細(xì)胞周期蛋白表達(dá)的變化。 研究結(jié)果：①成功培養(yǎng)口腔鱗癌原代細(xì)胞，鏡下示腫瘤細(xì)胞呈多角形、短梭形；免疫組化示CD44表達(dá)陽(yáng)性，結(jié)

3、合病理活檢結(jié)果，確定為鱗癌細(xì)胞；②5，10，20mg/L濃度的姜黃素具細(xì)胞毒性作用，24小時(shí)后即出現(xiàn)單位面積細(xì)胞數(shù)量減少、細(xì)胞間連接消失，胞體變小、變圓或形狀不規(guī)則，核固縮，胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，出現(xiàn)凋亡小體等現(xiàn)象；③細(xì)胞生長(zhǎng)增殖受限制，抑制率隨藥物濃度漸增加；流式分析儀測(cè)得細(xì)胞出現(xiàn)凋亡率，G2/M期發(fā)生阻滯，S及G2/M期比例漸增加，而G0/G1比例逐漸減少，上述變化均與藥物濃度呈正相關(guān)；④NF-κB、cyclin D1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減