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![Wnt通路調(diào)控因子Pygo2在肝癌發(fā)病機制中作用的初步研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/45c221a7-907f-461a-9e83-22307c709acf/45c221a7-907f-461a-9e83-22307c709acf1.gif)
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文檔簡介
1、目的:
1.研究Wnt信號通路調(diào)控因子Pygo2在肝癌、癌旁組織及肝癌細胞系中的表達水平,評價Pygo2在肝癌中的預(yù)后價值;
2.研究下調(diào) Pygo2表達對肝癌細胞生長、增殖等細胞生物學的影響,初步探索Pygo2通過影響Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機制。
3.研究炎癥因子IL-22與Pygo2的相關(guān)性及在診斷肝癌復(fù)發(fā)中的應(yīng)用價值。
方法:
1.利用Rea
2、l-time PCR、免疫組化檢測肝癌、癌旁組織中Pygo2的表達情況,利用Western blot檢測5種不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞系中Pygo2的表達情況,利用統(tǒng)計學方法分析Pygo2的不同表達水平與原發(fā)性肝癌患者預(yù)后的相關(guān)性;
2.利用shRNA技術(shù)建立Pygo2表達下調(diào)的肝癌細胞系SK-Hep1、Hep3B,分別采用CCK-8法細胞活性實驗、平板克隆形成實驗、裸鼠體外荷瘤實驗、免疫組化、Real-time PCR、雙熒光
3、素酶報告基因的方法研究 Pygo2表達下調(diào)對肝癌細胞生長、增殖等細胞生物學特性的影響并初步探索Pygo2通過影響Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機制。
結(jié)果:
1.從轉(zhuǎn)錄水平、蛋白水平證實Pygo2表達在肝癌組織中較癌旁組織明顯增高(P<0.01);Pygo2表達與肝癌細胞系侵襲轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān);Pygo2表達與肝癌患者預(yù)后呈負相關(guān)(P<0.05)。
2.通過生長、增殖、克隆形
4、成、裸鼠荷瘤等實驗發(fā)現(xiàn),與對照組相比,Pygo2表達下調(diào)后肝癌細胞系生長、增殖和成瘤能力明顯減弱;通過雙熒光素酶報告基因檢測、Real-time PCR發(fā)現(xiàn),Pygo2表達下調(diào)后Wnt/β-catenin信號通路靶基因表達降低,尤以c-myc為甚,在mRNA水平Pygo2與c-myc呈正相關(guān)。
3.肝癌復(fù)發(fā)患者血清中IL-22水平與Pygo2表達量呈正相關(guān),肝癌復(fù)發(fā)組患者血清IL-22水平明顯增高。
結(jié)論:
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