1、目的及背景:鼻息肉(nasal polyposis，NP)是一種鼻部黏膜的炎癥性疾病，在鼻科臨床上呈多發(fā)態(tài)勢(shì)，根據(jù)歐洲的鼻竇炎及鼻息肉治療指南(Ep3OS)，鼻息肉被認(rèn)為是慢性鼻-鼻竇炎(chronic sinusitis，CRS)的一個(gè)亞型。由于該病較高的復(fù)發(fā)率及目前治療手段無法達(dá)到完全根治該病，鼻息肉已成為嚴(yán)重降低人類生活質(zhì)量并帶來大量社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的全球性健康問題。
　　對(duì)NP發(fā)病機(jī)制的研究在近幾十年是鼻部炎癥性疾病研究領(lǐng)域的

2、重點(diǎn)，國內(nèi)外學(xué)者們對(duì)NP的起病原因及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了大量的科學(xué)研究，盡管對(duì)于其疾病機(jī)理仍不能徹底地的予以明確，但是幾乎所有的研究均表明:鼻息肉的形成是一個(gè)多種因素參與、多步驟發(fā)展的過程，慢性持續(xù)性炎癥與變態(tài)反應(yīng)與之關(guān)系密切。而Th淋巴細(xì)胞，尤其是Th17細(xì)胞在中國人鼻息肉的發(fā)病過程中扮演了重要的角色，而且變應(yīng)性因素在中國人鼻息肉中很可能通過影響Th17細(xì)胞的反應(yīng)發(fā)揮了關(guān)鍵作用。
　　作為一種關(guān)鍵的核轉(zhuǎn)錄因子，在胞外信號(hào)的作用下，ST

3、AT3的酪氨酸基團(tuán)被JAK磷酸化，以二聚體的形式進(jìn)入胞核內(nèi)，與胞核中特異的基因片段相結(jié)合，調(diào)節(jié)下游基因及相關(guān)蛋白的表達(dá)。近年的研究發(fā)現(xiàn)STAT3信號(hào)通路在IL-6的刺激下參與Th17細(xì)胞的增殖活化，由 STAT3介導(dǎo)下引起的Th17細(xì)胞反應(yīng)在葡萄膜炎、克羅恩病、哮喘等免疫及炎癥性疾病的發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用。那在中國，作為同樣是Th17細(xì)胞反應(yīng)為主的NP中，STAT3信號(hào)通路的異常激活是否也存在呢？變應(yīng)性因素對(duì)NP中Th17細(xì)胞反應(yīng)的影響與

4、其與NP中STAT3通路的活化狀態(tài)的關(guān)系有關(guān)聯(lián)嗎？
　　為研究上述疑問，本研究以已經(jīng)明確診斷的NP患者作為實(shí)驗(yàn)的對(duì)象，并將他們按照個(gè)體有無變應(yīng)性的標(biāo)準(zhǔn)而分為atopic NP和non-atopicNP兩個(gè)組，以STAT3信號(hào)通路相關(guān)關(guān)鍵因子的異常激活為支撐點(diǎn)，研究分析在中國西南地區(qū)的漢族人群中，不同類型NP的局部炎癥特性與免疫機(jī)制，以解釋在atopic和non-atopic NP發(fā)病機(jī)制中STAT3信號(hào)通路所起的作用，同時(shí)探討變應(yīng)

5、性因素在NP中的作用與STAT3信號(hào)通路是否相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)將從新的研究途徑研究NP的發(fā)病機(jī)制，完善中國人NP是以Th17細(xì)胞反應(yīng)為主這一理論，為NP的研究與治療提供新的方向與靶點(diǎn)。
　　第一部分STAT3信號(hào)通路相關(guān)因子在伴和不伴變應(yīng)性體質(zhì)鼻息肉患者中表達(dá)的研究。
　　目的:通對(duì)檢測(cè)atopic和non-atopic NP兩組患者息肉組織中STAT3信號(hào)通路中代表激活的關(guān)鍵因子及其下游Th17細(xì)胞在RNA、蛋白水平的相關(guān)因子的

6、表達(dá)。觀察兩組患者鼻腔鼻竇病變局部STAT3信號(hào)通路的異常激活狀態(tài)、Th17細(xì)胞反應(yīng)狀態(tài)及兩組間的異同。旨在探討 STAT3信號(hào)通路的異常激活在NP發(fā)病機(jī)制中的意義，及NP中變應(yīng)性因素對(duì)Th17反應(yīng)的影響與STAT3信號(hào)通路的異常激活之間的關(guān)系。
　　方法:對(duì)atopic-NP組20例，non-atopic NP組20例及對(duì)照的下鼻甲組織10例，采用免疫組化及Western Blot方法檢測(cè)兩組NP組織中pSTAT3及SOCS3的

7、表達(dá);采用ELISA檢測(cè)NP組織中IL-6、sIL-6R、IL-17的表達(dá);采用real-time PCR檢測(cè)NP組織中RORc的表達(dá);采用免疫熒光雙標(biāo)方法檢測(cè)NP局部組織中CD4+RORc+細(xì)胞的表達(dá)。同時(shí)，以相關(guān)性分析的方法統(tǒng)計(jì)分析息肉組織中Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子與STAT3信號(hào)通路的關(guān)鍵因子的關(guān)系。
　　結(jié)果: NP患者息肉組織中RORc、IL-17及CD4+RORc+細(xì)胞的水平比對(duì)照組明顯上升，在atopic NP組比另

8、一NP組的表達(dá)更高，差距有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與對(duì)照組相比，NP患者息肉組織中IL-6、sIL-6R、pSTAT3及SOCS3的表達(dá)顯著升高，且在atopic NP組pSTAT3的表達(dá)顯著高于non-atopic NP組，SOCS3的表達(dá)在atopic NP組顯著低于non-atopic NP組，而在這兩組NP中的IL-6與sIL-6R的水平的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在NP組織中，pSTAT3的表達(dá)水平與RORc、IL-17及CD4+RORc+細(xì)胞水

9、平呈正相關(guān)，SOCS3的表達(dá)與pSTAT3的水平呈負(fù)相關(guān)，而IL-6與sIL-6R的水平與息肉組織中SOCS3的表達(dá)與pSTAT3的水平相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:STAT3信號(hào)通路的異常激活及其下游Th17細(xì)胞反應(yīng)的亢進(jìn)存在于NP中，其在NP的發(fā)病機(jī)制中起到關(guān)鍵作用;且NP患息肉組織中STAT3信號(hào)通路關(guān)鍵因子與Th17細(xì)胞相關(guān)因子基本上消長一致，說明STAT3信號(hào)通路的異常激活在Th17細(xì)胞反應(yīng)過度亢進(jìn)過程中扮演關(guān)鍵角色;

10、Atopic NP存在更為嚴(yán)重的STAT3信號(hào)通路的異常激活和更為嚴(yán)重的Th17細(xì)胞反應(yīng)的亢進(jìn)，說明變應(yīng)性因素可能通過影響STAT3信號(hào)通路的異常激活推動(dòng)Th17反應(yīng)的進(jìn)一步亢進(jìn)，從而促進(jìn)有更嚴(yán)重臨床病理特征的NP的發(fā)生發(fā)展。而SOCS3的表達(dá)差異可能是引起atopic NP組與non-atopic NP組出現(xiàn)IL-6及sIL-6R的水平與其下游的細(xì)胞因子的表達(dá)消長不統(tǒng)一的原因。本文從以下三部分進(jìn)行了論述。
　　第二部分STAT3

11、抑制劑阻斷鼻息肉中STAT3信號(hào)通路后相關(guān)下游因子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究。
　　目的:通過不同濃度的STAT3信號(hào)通路抑制劑AG490作用于NP組織單細(xì)胞懸液，觀察阻斷NP中STAT3信號(hào)通路后對(duì)NP局部組織的Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子的影響，并分析不同濃度下Th17細(xì)胞相關(guān)因子表達(dá)有無差異。以期在前一部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上進(jìn)一步探討STAT3信號(hào)途徑在NP發(fā)病中的作用，從體外研究的方面證明STAT3信號(hào)途徑在中國人NP的發(fā)病中扮演的關(guān)鍵角色。<

12、br>　　方法:用不同濃度的STAT3通路抑制劑AG490體外作用培養(yǎng)于20例NP組織單細(xì)胞懸液（atopic NP10例，non-atopic NP10例）48h，根據(jù)濃度分為低濃度組(50μM)與高濃度組(100tM)，以PBS代替AG490干預(yù)作為對(duì)照組。采取流式細(xì)胞術(shù)分析各組標(biāo)本中Th17細(xì)胞的分布，運(yùn)用real-time PCR檢測(cè)各組RORc的水平，以ELISA方法檢測(cè)各組中IL-17的水平。
　　結(jié)果:用AG490處

13、理48h后，AG490作用組的Th17細(xì)胞及相關(guān)因子（RORc及IL-17）的表達(dá)較對(duì)照組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;且的Th17細(xì)胞及相關(guān)因子（RORc及IL-17）的表達(dá)水平在高濃度AG490作用組較低濃度AG490作用組的水平有明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:在NP中STAT3信號(hào)通路的激活與Th17細(xì)胞的亢進(jìn)反應(yīng)密切相關(guān)，AG490阻斷STAT3活化可顯著下調(diào)RORc及IL-17的表達(dá)，抑制NP中的Th17細(xì)胞反應(yīng)

14、。上述結(jié)果從體外實(shí)驗(yàn)方面證實(shí)STAT3信號(hào)通路是通過影響Th17細(xì)胞反應(yīng)來促進(jìn)NP的發(fā)生發(fā)展，在NP的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。
　　第三部分塵螨變應(yīng)原體外刺激對(duì)鼻息肉患者STAT3信號(hào)通路相關(guān)因子局部表達(dá)的影響。
　　目的:采用塵螨特異性變應(yīng)原(HDM)作為刺激原，在體外短時(shí)期內(nèi)刺激并培養(yǎng)患者NP組織單細(xì)胞懸液中的單個(gè)核細(xì)胞，觀察變應(yīng)原體外刺激后，對(duì)兩組NP患者STAT3信號(hào)通路的影響，分析兩組間STAT3信號(hào)通路相關(guān)因子表

15、達(dá)變化的差異，在前兩部分實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)一步闡述變應(yīng)性因素對(duì)兩組患者STAT3信號(hào)通路異常激活的影響，體外證實(shí)變應(yīng)性因素是通過影響STAT3信號(hào)通路異常激活來促進(jìn)TH17細(xì)胞的亢進(jìn)反應(yīng)從而在NP發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用的。
　　方法:分別以大劑量HDM+PHA及單純PHA，對(duì)atopic和non-atopic NP患者局部NP組織單細(xì)胞懸液中細(xì)胞予以體外刺激培養(yǎng)48h，采用Western Blot方法檢測(cè)兩組NP組織中pSTAT3的表達(dá)，R

16、eal-time PCR方法及Western Blot方法檢測(cè)SOCS3的表達(dá)，并分析兩組間差異。
　　結(jié)果:HDM+PHA刺激后的NP組患者局部NP組織單細(xì)胞懸液細(xì)胞中pSTAT3及SOCS3的表達(dá)較對(duì)照組明顯上升，且在NP組內(nèi)，變應(yīng)性NP組的pSTAT3水平比非變應(yīng)性NP組明顯上升，而變應(yīng)性NP組SOCS3的表達(dá)水平則較非變應(yīng)性NP組顯著下降;此外，在atopic NP組，HDM+PHA刺激使pSTAT3表達(dá)水平較PHA刺激顯

17、著升高，而SOCS3的表達(dá)水平較PHA刺激顯著降低;而non-atopic NP組與對(duì)照組經(jīng)HDM+PHA刺激和經(jīng)PHA刺激對(duì)pSTAT3及SOCS3的表達(dá)水平影響差異無顯著性。
　　結(jié)論:伴變應(yīng)性的NP患者的局部NP組織中HDM可誘導(dǎo)STAT3相關(guān)因子表達(dá)上調(diào)，揭示了STAT3信號(hào)通路在變應(yīng)性上氣道炎癥中的重要作用，證實(shí)了變應(yīng)性因素可通過影響STAT3信號(hào)通路在NP的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用;此外，在atopic NP組HDM誘導(dǎo)的S