1、背景與目的：
　　晚期糖基化終末產物(Adavnaced glyeation end porudets, AGEs)是在非酶促反應條件下，氨基酸、核酸、脂類或蛋白質等大分子物質的游離氨基與糖的醛基經過一系列反應后產生一組相對穩(wěn)定的終末產物。AGEs的蓄積及炎癥相關巨噬細胞的激活對糖尿病腎病（diabetic nephropathy, DN）的發(fā)生和發(fā)展起重要作用。轉化生長因子-β相關激酶1( transforming growth

2、 factor-β-activated kinase1， TAK1)本質上是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是核轉錄因子(Nuclear transcription KappaB，NF-κB)信號轉導通路的上游調節(jié)因子，在先天免疫和炎癥反應中起關鍵作用。但TAK-1/NF-κB信號通路在AGEs誘導的巨噬細胞中的具體作用機制的報道較少。本研究采用TAK1抑制劑(5Z-7-oxozeaenol, OZ)作用于AGEs誘導的小鼠骨髓來源巨噬細胞

3、，從細胞和分子水平觀察TAK1信號通路及相關炎癥因子變化，評價TAK1/NF-κB信號通路在DN發(fā)病機制中的作用，并從分子或基因水平阻斷TAK1信號通路為其防治提供新思路。
　　方法：
　　提取6-8周齡的C57小鼠骨髓細胞，在一定條件下，使用L-929細胞上清液將其誘導為小鼠骨髓來源巨噬細胞（ bone marrow-derived macrophages, BMMs），隨后使用流式細胞術分析成熟巨噬細胞純度，將BMMs接

4、種于96孔板，以CCK-8法檢測不同濃度的TAK1抑制劑對AGEs作用下巨噬細胞活力的影響。細胞分組如下：抑制劑組（OZ300），牛血清白蛋白組(BSA)，正常對照組(NC)，AGEs組(AGEs)， AGEs+TAK1抑制劑組(AGEs+OZ)，在刺激的對應時間點收集 BMMs。激光共聚焦顯微鏡及流式細胞術檢測各組巨噬細胞的 M1亞型的表達，Western blot法檢測各組總蛋白中 p-TAK1, TAK1, TAB1及NF-κB

5、p65蛋白的表達；Elisa法檢測各組細胞中炎癥細胞因子白細胞介素-1β（interleukin-1 beta IL-1β）、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-alpha TNF-α)、單核細胞趨化因子（monocyte chemo-attractant protein-1 MCP-1）的表達。
　　結果：
　　與正常對照相比，當抑制劑濃度為10,30,100和300 nmol/L， AGEs誘導的B

6、MMs活力無明顯影響(P>0.05)，而1000nmol/L的抑制劑對BMMs的活力有影響(P<0.05)。激光共聚焦法及流式細胞術檢測 AGEs刺激下，骨髓來源巨噬細胞功能表型可活化為M1型巨噬細胞；而抑制劑的干預使M1型巨噬細胞表面標記物表達百分比明顯降低(P<0.01)。Western blot結果顯示p-TAK1, TAB1, NF-κB p65蛋白在AGEs組的表達強于NC（P<0.05）組；但抑制劑組蛋白表達明顯弱于AGEs

7、組(P<0.05)。TAK1在各組的表達無明顯變化(P>0.05)。ELISA法發(fā)現(xiàn)AGEs組的IL-1β、TNF-α及 MCP-1水平較對照組明顯增高，但在加入 TAK1抑制劑（100 nmol/L和300 nmol/L）后，TNF-α及MCP-1的水平較AGEs組降低，有統(tǒng)計學意義，抑制劑濃度在300 nmol/L時，IL-1β的降低水平有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　AGEs能誘導BMMs向巨噬細胞M1表型活化，巨噬細