絲素蛋白熒光微-納米顆粒的制備及其與細胞的相互作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、不同細胞對不同尺寸的絲素蛋白顆粒表現(xiàn)出不同的粘附或內吞行為。用絲素顆粒作為藥物控制釋放載體時,細胞是否對其粘附或內吞,將直接影響其裝載的藥物的傳遞效率和對細胞的作用位點。為了探討不同細胞對不同尺寸的絲素顆粒表現(xiàn)出的相應的細胞行為,本文用高壓靜電噴射技術等方法制備四種不同粒徑的絲素蛋白顆粒,分別與人臍靜脈血管內皮細胞EA.hy926和人宮頸癌細胞HeLa共培養(yǎng),研究四種絲素顆粒與兩種細胞的相互作用規(guī)律,為向正常組織細胞或腫瘤細胞輸送藥物時

2、選擇相應的絲素載體尺寸提供初步依據(jù)。
  首先,采用高壓靜電噴射等方法制備出四種不同粒徑的微/納米顆粒,并采用異硫氰酸熒光素(FITC)和量子點(QD)兩種物質,標記絲素微/納米顆粒,獲得絲素蛋白熒光微/納米顆粒。用掃描電鏡(SEM)觀察絲素微/納米顆粒的表面形貌,同時用激光共聚焦、透射電鏡、傅立葉變換紅外吸收光譜、能譜、熒光光譜儀等手段對熒光微/納米顆粒進行鑒定。結果表明,所制得的四種微/納米顆粒的平均粒徑分別為232.1μm、

3、105.1μm、1.9μm、51.1 nm,且四種微/納米顆粒形狀呈球形或橢球形,表面有小顆粒狀物質、形貌粗糙;兩種熒光標記物均能標記到絲素蛋白微/納米顆粒表面,且量子點標記的微/納米顆粒具有較高的熒光穩(wěn)定性。
  其次,研究了粒徑為1.9μm(SFMP3)和51.1 nm(SFNP)的絲素蛋白顆粒與細胞的相互作用。采用熒光示蹤的方法動態(tài)跟蹤EA.hy926細胞和HeLa細胞對SFMP3和SFNP的粘附及攝取,并用CCK-8法檢測

4、不同濃度的絲素顆粒及兩種不同方式標記后絲素顆粒的細胞增殖。結果表明,微米級絲素顆粒(SFMP3)對細胞增殖有促進作用,在HeLa細胞培養(yǎng)基中絲素微米顆粒濃度大于0.5 mg/ml時,這一作用比EA.hy926細胞顯著;而納米級絲素顆粒(SFNP)對細胞的增殖有抑制作用,對EA.hy926細胞的抑制作用比對HeLa細胞的抑制作用顯著。對與EA.hy926細胞和HeLa細胞共培養(yǎng)的絲素顆粒進行跟蹤觀察的結果表明,微米級顆粒與細胞培養(yǎng)后能與細

5、胞貼附,但不會被細胞攝取;而納米級顆粒則在與細胞共培養(yǎng)后會被細胞攝入,隨著時間的延長攝入量越多,HeLa細胞對絲素納米顆粒的攝入能力明顯比EA.hy926細胞強。
  最后,研究了細胞在絲素微球(SFMP1和 SFMP2)表面的粘附及生長。掃描電鏡(SEM)觀察結果表明,HeLa細胞和EA.hy926細胞在與絲素微球共培養(yǎng)8-12 h后,培養(yǎng)板表面粘附的細胞開始遷移并粘附在微球表面,隨著培養(yǎng)時間的延長,粘附在微球表面的細胞開始鋪展

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