1、丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）是丙型肝炎的病原體，嚴(yán)重威脅著人們的健康。對(duì)于HCV感染尚無(wú)有效的疫苗，臨床上主要采用抗病毒策略進(jìn)行治療，但存在諸多問(wèn)題。HCV疫苗的研發(fā)需要我們加深對(duì)病毒的基礎(chǔ)研究以及其與宿主之間相互作用的認(rèn)識(shí)。
　　HCV的復(fù)制周期與宿主的脂代謝緊密相關(guān)，血液中的HCV病毒與脂蛋白等結(jié)合形成脂病毒顆粒(lipoviroparticles，LVPs)，載脂蛋白E（apoE）作為L(zhǎng)VPs的

2、重要組成部分，在HCV病毒的復(fù)制周期中起到重要作用，但具體的作用機(jī)制尚不十分清楚。
　　有研究通過(guò)RNA干擾技術(shù)下調(diào)Huh7.5細(xì)胞中apoE的表達(dá)使HCV病毒的感染性下調(diào)10-100倍，因此很多人認(rèn)為apoE是HCV病毒感染復(fù)制所必需的蛋白。但是RNA干擾技術(shù)不能完全抑制蛋白的表達(dá)，因而不能完全確定apoE是否是HCV復(fù)制所必須的。本研究通過(guò)CRISPR/Cas9系統(tǒng)敲除Huh7.5細(xì)胞中apoE的表達(dá)，并采用HCV進(jìn)行感染，通

3、過(guò)Western Blot、IFA、qRT-PCR、IHC分別從病毒蛋白、RNA以及感染性滴度方面檢測(cè)HCV病毒，說(shuō)明apoE對(duì)HCV病毒的感染及復(fù)制并非是必需的;
　　apoE在機(jī)體內(nèi)主要由肝臟合成，并分泌到血液中，既存在于肝細(xì)胞內(nèi)也存在于細(xì)胞外，研究認(rèn)為apoE在細(xì)胞內(nèi)與HCV結(jié)合進(jìn)而在HCV的組裝機(jī)釋放過(guò)程中起重要作用，然而分泌至細(xì)胞外的apoE是否能與HCV結(jié)合一直未被證明，本研究通過(guò)轉(zhuǎn)染表達(dá)分泌型的apoE-HA，并與H

4、CV病毒進(jìn)行免疫共沉淀，結(jié)果表明HCV病毒能夠與分泌型的apoE在細(xì)胞外結(jié)合，同時(shí)對(duì)加入apoE的HCV進(jìn)行滴度檢測(cè)表明這種結(jié)合能夠改變HCV病毒的感染性。
　　由于HCV病毒顆粒能夠與apoE結(jié)合，E1E2膜蛋白位于病毒顆粒表面，有研究通過(guò)構(gòu)建含有E1E2蛋白的HCV假病毒顆粒(HCVpp)并研究其與apoE之間的相互作用，結(jié)果HCVpp能夠與apoE發(fā)生相互作用，提示了HCV病毒顆粒通過(guò)膜蛋白E1E2與apoE發(fā)生相互作用。為

5、了進(jìn)一步探討研究apoE與E1E2之間的結(jié)合，通過(guò)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系分別表達(dá)E1、E2、E1E2蛋白并與分泌型apoE-HA進(jìn)行免疫共沉淀，實(shí)驗(yàn)提示apoE與E1E2蛋白二聚體結(jié)合，與E1蛋白不發(fā)生結(jié)合，而與E2蛋白存在微弱的結(jié)合。E1E2膜蛋白是HCV疫苗研發(fā)中重要的抗原蛋白，與apoE的結(jié)合可能影響其免疫原性，為了確定E1E2蛋白進(jìn)入機(jī)體能否被apoE結(jié)合，通過(guò)將E1E2與人血清進(jìn)行免疫共沉淀，結(jié)果E1E2能夠與人血清中apoE結(jié)合。我