1、目的：
　　觀察在不同濃度谷氨酸的作用條件下神經(jīng)元細胞釋放ATP的情況;進一步觀察與ATP釋放相關(guān)的神經(jīng)元細胞狀態(tài)的改變;為減輕該ATP釋放引起的細胞損傷尋找有效方法。
　　方法：
　　1、原代培養(yǎng)胎齡16-18天的CD-1小鼠大腦皮層神經(jīng)元，細胞分化成熟后隨機分為A對照組;B谷氨酸處理組，谷氨酸處理組再分為不同濃度的亞組，分別為0.01 mM、0.1 mM、1mM、5 mM、10 mM，加入谷氨酸后0 min、3 m

2、in、5 min、15 min、30 min、60 min收集細胞外液，應(yīng)用多功能酶標儀檢測細胞外液中的ATP濃度。對照組加等量的細胞培養(yǎng)液。篩選有效的谷氨酸濃度和作用時間。
　　2、將小鼠大腦皮層神經(jīng)元隨機分為A對照組;B谷氨酸處理組(谷氨酸終濃度為0.1 mM，作用時間為30 min);C腺苷受體阻滯劑（咖啡因）組;DATPase組;E谷氨酸+咖啡因組;F谷氨酸+ ATPase組;G谷氨酸+咖啡因+ATPase組，在谷氨酸作用

3、30 min后的2h、6h、12h、24 h收集細胞外液，應(yīng)用酶標儀檢測細胞外液中LDH的釋放，進而得到不同處理組LDH的釋放比，借此觀察細胞膜的完整性。
　　3、用蓋玻片培養(yǎng)小鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞，成熟后分組同上，采用AnnexinⅤ-FITC/PI對細胞進行雙染，在熒光顯微鏡下檢測不同處理組細胞凋亡與壞死情況。
　　結(jié)果：
　　1、細胞外液ATP濃度檢測結(jié)果顯示:與對照組相比，不同濃度谷氨酸處理組的細胞外液中ATP

4、濃度均顯著增加（P＜0.01），尤其以0.1 mM谷氨酸處理組增加最為顯著;與對照組相比，谷氨酸處理3 min、5 min、15 min細胞外液ATP的釋放均有顯著增加，尤其以3 min增加最為顯著，隨著谷氨酸作用時間的延長，細胞外液中ATP的濃度逐漸降低。確定谷氨酸的有效作用代表性濃度為0.1 mM，代表性時間為3 min。
　　2、神經(jīng)元LDH釋放比檢測的結(jié)果顯示:與對照組相比，咖啡因組和ATPase組均無統(tǒng)計學意義;與對照組

5、相比，谷氨酸處理組(谷氨酸終濃度為0.1 mM，作用時間為30 min)、谷氨酸+咖啡因組、谷氨酸+ATPase組、谷氨酸+咖啡因+ ATPase組LDH釋放比均有顯著增加(P＜0.01）;與谷氨酸處理組相比，谷氨酸+咖啡因組、谷氨酸+ ATPase組、谷氨酸+咖啡因+ATPase組LDH釋放比均有顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)，且在2h和12h時間點與谷氨酸+咖啡因組相比，谷氨酸+咖啡因+ ATPase組LDH釋放比顯著降低(

6、P＜0.01或P＜0.05)，在2h、6h、12h和24 h時間點與谷氨酸+ATPase組相比，谷氨酸+咖啡因+ATPase組LDH釋放比顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。與2h相比，谷氨酸處理組和谷氨酸+ ATPase組LDH釋放比在6h顯著增加，而各組LDH釋放比在12h和24 h均顯著增加(P＜0.01)，尤以24 h增加最多。
　　3、細胞染色形態(tài)學觀察結(jié)果:與對照組相比，谷氨酸處理組神經(jīng)細胞凋亡與壞死明顯增多;與谷

7、氨酸處理組相比，谷氨酸+咖啡因組、谷氨酸+ ATPase組、谷氨酸+咖啡因+ ATPase組細胞凋亡與壞死明顯減少。
　　實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析采用SPSS17.0軟件，采用描述性分析、T檢驗、單因素方差分析(ANOVA)等統(tǒng)計學分析方法。檢驗水準α值為0.05，采用雙側(cè)檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　神經(jīng)元細胞在谷氨酸的作用下有明顯的ATP釋放。ATP的釋放可以對神經(jīng)元產(chǎn)生損傷作用，通過減少AT