1、目的：探討Notch信號節(jié)點(diǎn)分子Notch1、Hes1在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUMSCs）向胰島前體細(xì)胞分化過程中的表達(dá)及其與Ngn3的關(guān)系。
　　方法:
　　1.分離培養(yǎng)并鑒定hUMSCs；
　　2.采用聯(lián)合分階段誘導(dǎo)法，取P5代hUMSCs向胰島前體細(xì)胞分化，倒置相差顯微鏡觀察誘導(dǎo)前后（第7天、14天、21天）細(xì)胞形態(tài)變化，免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測誘導(dǎo)后Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素的表達(dá)；
　　3.電鏡觀察誘

2、導(dǎo)前后的胰島前體細(xì)胞與對照組hUMSCs的結(jié)構(gòu)差異；
　　4.誘導(dǎo)后（第7天、14天、21天）分別取細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)法、real-time PCR、Western-blot檢測Notch信號通路相關(guān)分子以及Ngn3的表達(dá)變化；
　　5.加入γ分泌酶抑制劑（γ-secretase inhibitor）DAPT后，Western-blot檢測Notch信號通路相關(guān)分子以及Ngn3的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：成功分離培養(yǎng)hU

3、MSCs，經(jīng)誘導(dǎo)后細(xì)胞胞體呈現(xiàn)寬大形態(tài)，并出現(xiàn)胰島前體細(xì)胞的集落，免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測誘導(dǎo)21天后細(xì)胞Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素均呈陽性表達(dá)，電鏡結(jié)果顯示胞體內(nèi)有分泌顆粒；Western-blot檢測Ngn3在誘導(dǎo)過程中逐漸升高，至誘導(dǎo)14d達(dá)到峰值，21d下降；Notch1在誘導(dǎo)后7d時(shí)最高，對照組最低；Hes1的表達(dá)7d、14d與對照組無明顯差異，于21d下降；添加DAPT后，Notch信號通路節(jié)點(diǎn)分子Hes1表達(dá)量下降，同時(shí)