1、大腦皮質(zhì)發(fā)育障礙(malformation of cortical development，MCD)是由諸多基因和環(huán)境因素影響神經(jīng)細胞增殖、遷移和分化而致腦發(fā)育異常的一類疾病，然而患者的臨床表現(xiàn)卻存在差異:有些患者癥狀出現(xiàn)早，表現(xiàn)為嚴重的神經(jīng)功能缺損，而有些患者則表現(xiàn)為癲癇或需要通過篩選才能發(fā)現(xiàn)的無明顯癥狀的神經(jīng)功能缺損。分子生物學，遺傳學以及影像學的快速發(fā)展既豐富了人們對大腦皮質(zhì)正常發(fā)育及其異常導致的大腦畸形種類的認識，同時也積累了大

2、量臨床以及基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)并基于這些發(fā)現(xiàn)提出了許多假說。限于臨床研究以及對病理標本的基礎(chǔ)研究的局限性，合適的動物模型是非常必要的補充，其不僅在驗證臨床以及基礎(chǔ)研究的結(jié)果等方面發(fā)揮著非常重要的作用，其還為轉(zhuǎn)化醫(yī)學的發(fā)展做出了巨大貢獻。在妊娠期給予甲基氧化偶氮甲醇(Methylazoxymethanol，MAM)處理的孕鼠的后代因具有與MCD患者相似的病理改變，分子生物學以及行為學改變而被認為是很有前景的MCD模型并備受關(guān)注。
　　糖皮質(zhì)

3、激素受體(Glucocorticoid receptor，GR)和鹽皮質(zhì)激素受體(Mineralocorticoidreceptor，MR)均屬于核受體超家族，其配體均為糖皮質(zhì)激素，對基因轉(zhuǎn)錄有調(diào)節(jié)作用，從而對細胞增殖，分化和凋亡程序進行調(diào)控。對下丘腦-垂體-腎上腺軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA)功能的維持有著非常重要的作用，且已證實多種疾病與其異常有關(guān)。癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見疾病之一，其

4、發(fā)生與HPA軸關(guān)系密切;MCD是癲癇的重要病因，且往往表現(xiàn)為難治性癲癇，對糖皮質(zhì)激素治療反應(yīng)差，而激素需與受體結(jié)合才能發(fā)揮作用，因此，受體異常是其可能原因。鑒于GR、MR的重要功能，我們推測GR、MR可能與MCD形成及其致癇機制有關(guān)。
　　目的:運用MAM誘導新型的MCD大鼠模型;研究其病理改變程度與其年齡的關(guān)系、癲癇發(fā)作易感性及癲癇發(fā)作對已存在的MCD病理形態(tài)的影響;研究GR和MR在MCD動物模型大腦皮質(zhì)中的表達，探討其在MCD

5、形成及MCD致癇機制中的作用。
　　方法:對妊娠15天的SD孕鼠間隔12小時給予二次腹腔注射MAM建立MCD模型，對照組給予生理鹽水處理;觀察子鼠的日常行為并在產(chǎn)后第90天時行頭皮腦電圖檢測。琉瑾-吉姆薩染色被運用于顯示P0、7、14、28、60、90子鼠大腦皮質(zhì)與海馬結(jié)構(gòu)，NeuN免疫熒光染色被運用于顯示神經(jīng)元的分布。采用匹魯卡品誘導癲癇發(fā)作建立癲癇模型并研究癲癇發(fā)作對MCD病理形態(tài)的影響。利用Real Time-PCR(RT-

6、PCR)、Western Blot技術(shù)分別檢測2月齡MCD模型病變大腦皮質(zhì)與對照組對應(yīng)部位大腦皮質(zhì)中GR、MR的mRNA和蛋白水平表達。
　　結(jié)果:MAM組子鼠反應(yīng)遲鈍，活動量減少。MAM組大腦皮質(zhì)尺寸較對照組明顯減少，其皮層變薄，上、下丘腦不能被枕葉完全覆蓋;對腦質(zhì)量分析發(fā)現(xiàn)除P0組外，其他組中MAM組腦質(zhì)量明顯輕于對照組。病理染色及免疫熒光染色顯示MAM組子鼠大腦皮質(zhì)較對照組變薄，其層狀結(jié)構(gòu)紊亂，皮質(zhì)和海馬內(nèi)出現(xiàn)團塊狀的增殖結(jié)

7、節(jié)、異位神經(jīng)元和胞體較大的異形神經(jīng)元，且鼠齡越長病理改變越明顯。MAM組癲癇易感性增高，給予較低劑量匹魯卡品即能出現(xiàn)全身強直發(fā)作，即Ⅳ-Ⅴ級癲癇樣發(fā)作，甚至癲癇持續(xù)狀態(tài)，繼之偶有自發(fā)癲癇發(fā)作，病理檢查見肥大/異形的錐形神經(jīng)元，其皮質(zhì)發(fā)育異常的程度較單純MAM組加重。RT-PCR結(jié)果顯示MAM組大腦皮質(zhì)中的GR mRNA相對表達量較對照組顯著降低(p＜0.05)，MR mRNA則無明顯差異;與RT-PCR結(jié)果一致，Western Blot

8、結(jié)果顯示MAM組大腦皮質(zhì)中的GR蛋白表達較對照組顯著降低(p＜0.05)，MR蛋白表達則無明顯差異。
　　結(jié)論:對妊娠15夭SD孕鼠給予二次腹腔注射MAM可成功建立MCD模型，其病理特征與MCD患者病理改變極為相似，且病變程度隨著鼠齡增長而加重，提示MAM模型是研究MCD的適合模型;MAM組癲癇易感性增高，聯(lián)合匹魯卡品誘導癲癇發(fā)作后其病理改變程度較單純MAM組加重，提示基于MAM模型的匹魯卡品“二次打擊”法可能是建立基于MCD的癲