microRNA-146a介導宿主防御布氏菌侵染的作用機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討microRNA-146a(miR-146a)表達與宿主防御布氏菌感染之間的關(guān)系并分析其作用機制。
  方法:以人工合成的miR-146a模擬物為模板建立擴增miR-146a的標準曲線。提取布病患者與健康志愿者血清的總RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后進行實時定量PCR(qRT-PCR)擴增miR-146a。比較分析患者與健康志愿者之間miR-146a的表達差異;分別比較患者血清抗體滴度、發(fā)病天數(shù)及臨床癥狀與miR-146a表達水平的相

2、關(guān)性。用羊種布氏菌16M株感染小鼠巨噬細胞,從細胞裂解液中提取總RNA,運用qRT-PCR對miR-146a的表達水平進行檢測。構(gòu)建小鼠布氏菌16M感染模型,提取脾臟總RNA進行熒光定量PCR擴增,觀察小鼠脾臟中miR-146a表達情況。分別將miR-146a模擬物(mimics)、抑制物(inhibitor)轉(zhuǎn)染Hela細胞,比較轉(zhuǎn)染后布氏菌生長情況。
  結(jié)果:患者血清中miR-146a表達明顯受到抑制,與健康志愿者相比差異具

3、有統(tǒng)計學意義(P<0.001);血清抗體滴度與miR-146a表達呈負相關(guān)性,不同滴度組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);miR-146a表達與患者發(fā)病時間無關(guān)(P>0.05);發(fā)熱和出汗癥狀與miR-146a濃度相關(guān)(P<0.05),而乏力、關(guān)節(jié)痛和腰背痛癥狀與miR-146a表達水平無相關(guān)性(P>0.05);小鼠巨噬細胞感染布氏菌組miR-146a的表達在0h和24h受到顯著抑制,與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);

4、小鼠感染模型組miR-146a的表達與對照組各時間點相比明顯降低,兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01);Hela細胞轉(zhuǎn)染miR-146a模擬物mimics與抑制物inhibitor后,感染16M組在4h與8h細菌生長與空白組相比差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);感染16M△virB組在4h時mimics組細菌生長對比空白組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在8h時inhibitor組細菌生長對比空白組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0

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