1、目的:肝臟缺血再灌注損傷是臨床工作中面的一項嚴重問題，是導致肝切除、肝外傷、肝移植以及體循環(huán)障礙后肝臟損傷和肝移植失敗的主要原因。降鈣素基因相關肽是含有37個氨基酸殘基的神經(jīng)肽，其具有功能強大的擴張血管和免疫調(diào)節(jié)作用，同時也可對多種器官的缺血再灌注損傷發(fā)揮保護作用。本實驗通過構建肝臟缺血-再灌注損傷的體外實驗模型并上調(diào)肝細胞的CGRP受體蛋白表達，探討外源性降鈣素基因相關肽及其受體對肝細胞缺氧-復氧損傷的保護作用，并對其相關作用機制進行

2、研究。
　　方法:HepG2細胞隨機分為3組:正常對照(NC)組、缺氧-復氧(H-R)組、CGRP處理(H-R+50nM CGRP)組。對各組細胞氧化應激損傷相關生物學指標，如丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、還原型谷胱甘肽(GSH)的含量進行檢測、使用western blot對細胞凋亡相關蛋白Bcl-2蛋白及Bax蛋白的表達含量進行檢測、并對細胞上清中乳酸脫氫酶(LDH)的活性和使用CCK-8試劑對細胞存活率進

3、行檢測。使用不同病毒滴度的重組慢病毒-CGRP受體基因載體對HepG2細胞進行感染，從而確定病毒基因載體感染的最佳感染復數(shù)值。以最佳感染復數(shù)值的病毒基因載體對HepG2細胞進行感染，使用Western blot對CGRP受體蛋白CRLR的表達水平進行檢測。經(jīng)病毒基因載體成功上調(diào)CGRP受體蛋白表達后，在缺氧-復氧模型中加入高濃度的CGRP，使用CCK-8試劑對肝細胞的存活率進行檢測。
　　結果:與正常培養(yǎng)細胞相比，缺氧-復氧模型可

4、誘發(fā)細胞發(fā)生明顯的氧化應激損傷，MDA含量明顯升高，SOD活性明顯降低，GSH含量顯著降低;細胞凋亡相關蛋白Bcl-2蛋白含量降低，Bax蛋白含量升高;細胞上清中LDH活性升高，細胞存活率明顯降低(p＜0.05)。缺氧-復氧模型中加入CGRP處理后細胞氧化應激損傷明顯緩解，細胞凋亡明顯減少，細胞上清中LDH活性明顯降低，細胞存活率明顯升高(p＜0.05)。但是，由于配體受體結合存在飽和性，限制了外源性CGRP對肝細胞缺氧-復氧損傷的保護

5、作用。以最佳感染復數(shù)值MOI=10對HepG2細胞進行慢病毒-CGRP受體基因載體感染，使用Western blot對CGRP受體蛋白CRLR的表達含量進行檢測，結果顯示其表達含量明顯升高(p＜0.05)。成功上調(diào)肝細胞CGRP受體蛋白后并使用高濃度的CGRP對缺氧-復氧模型中的肝細胞進行處理，CCK-8試劑對肝細胞增殖活性的檢測結果顯示肝細胞存活率再次明顯升高(p＜0.05)。
　　結論:外源性CGRP可以通過抑制氧化應激和細胞