1、目的：
　　探討IL-6/STAT3炎性信號通路(Interleukin-6/Signaltransducerandactivatoroftranscription3inflammatorysignallingpathway)調控SATB1(specialATrichsequencebindingprotein)表達及對乳腺癌干細胞(breastcancerstemcell)自我更新能力的影響。
　　方法：
　?。?）

2、將MCF-7細胞進行常規(guī)培養(yǎng)、傳代。通過轉染預實驗，驗證STAT3的慢病毒表達載體及STAT3的RNAi慢病毒表達載體（上海吉凱基因化學技術有限公司提供）轉染效率，并篩選出對STAT3干擾效率最高的慢病毒載體。
　?。?）應用STAT3的慢病毒表達載體及STAT3的RNAi慢病毒表達載體并分別轉染MCF-7細胞，同時設置空白對照組、2個空包病毒組對照組。
　?。?）采用無血清懸浮培養(yǎng)并添加IL-6的方法誘導建立乳腺癌干細胞的

3、體外模型，檢測同等數量的MCF-7細胞（空白組）、MCF-7/STAT3干擾組（26100）、MCF-7/空包病毒組對照組（CON077及CON235）和MCF-7/STAT3過表達組（14233）細胞中形成乳腺癌干細胞的微球體的數量和直徑大小（反映細胞中乳腺癌干細胞數量多少和自我更新能力的強弱）。
　　（4）收集上述5組微球體重新消化成單細胞懸液，采用CCK-8方法檢測MCF-7細胞（空白組）、MCF-7/STAT3干擾組（26

4、100）、MCF-7/空包病毒組對照組（CON077及CON235）和MCF-7/STAT3過表達組（14233）細胞的增殖活力。
　?。?）采用熒光定量RT-PCR檢測上述5組微球體中STAT3mRNA及SATB1mRNA表達水平，Westernblot檢測STAT3，pSTAT3及SATB1蛋白表達水平。
　?。?）通過流式細胞術檢測5組微球體中CD44+CD24－癌干細胞所占比例。
　　結果：
　?。?）M

5、CF-7細胞基本呈多邊形，梭形、成片貼壁生長。通過轉染預實驗篩選出對MCF-7細胞的STAT3干擾效率最高的質粒是26100：相對于對照組CON077，18940、18942和26100組的STAT3表達均有下降，分別下調了28％、38%和66%，但是26100的抑制效率最好，具有顯著性差異（P<0.05，n=3）。分組采用STAT3干擾載體26100用于干擾組。
　　（2）細胞成球能力檢測結果：5組細胞采用無血清懸浮培養(yǎng)并添加I

6、L-6連續(xù)誘導7d后，形成富集了乳腺癌干細胞的乳腺微球體，其中14233組細胞形成的微球體直徑顯著較大，數量顯著增多，26100組細胞形成的微球體直徑顯著減小，數量顯著減少，其余三組居中。
　?。?）CCK8細胞增殖活力檢測結果：與MCF-7組比較，MCF-7/STAT3過表達組（14233）微球體細胞增殖活力升高（P﹤0.01），MCF-7/STAT3干擾組（26100）微球體細胞增殖活力下降（P﹤0.01），MCF-7組與兩陰

7、性病毒對照組之間微球體細胞增殖活力無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　（4）IL-6/STAT3炎性信號通路關鍵組件及SATB1基因檢測結果：QRT-PCR檢測示：14233組與對應的空包病毒組CON235比較，其STAT3mRNA與SATB1mRNA均表達上調（P﹤0.01）；26100組與對應的空包病毒組CON077比較，其STAT3mRNA與SATB1mRNA均表達下調（P﹤0.01）；與MCF-7組比較，CON077及CO

8、N235組的STAT3mRNA及SATB1mRNA的表達變化無統(tǒng)計學差異，（P﹥0.05）。Westernblot檢測示：14233組STAT3，pSTAT3及SATB1蛋白表達高于空白對照組MCF-7、空包病毒組（CON077，CON235）和干擾組26100（P<0.05），且空白對照組MCF-7、空包病毒組（CON077，CON235）組STAT3，pSTAT3及SATB1蛋白表達高于干擾組26100（P<0.05）；陰性病毒對照

9、組（CON077，CON235）組與空白對照組MCF-7比較：STAT3，pSTAT3及SATB1蛋白表達變化無統(tǒng)計學差異（P﹥0.05）。
　?。?）流式細胞術檢測結果：5組微球體中14233組CD44+CD24－癌干細胞比例最高：56.43±2.85%；26100組最低：3.32±0.77%；其余三組居中分別為MCF-7組：12.41±1.53%；CON077組：13.33±2.01%；CON235組：13.58±2.35%，

10、14233組與MCF-7組，CON235組，CON077組及26100組比較其CD44+CD24－癌干細胞比例升高，P<0.05；26100組與MCF-7組，CON235組及CON077組比較其CD44+CD24－癌干細胞比例降低，P<0.05；MCF-7組，CON235組及CON077組之間CD44+CD24－癌干細胞比例變化無統(tǒng)計學差異，P﹥0.05。
　　結論：
　?。?）IL-6/STAT3通路激活可以誘導乳腺癌干細