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![膠州灣沉積物細(xì)菌多樣性及抑菌活性研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/31e2ae19-54b5-4a0e-8a75-810caa02238a/31e2ae19-54b5-4a0e-8a75-810caa02238a1.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、海洋環(huán)境提供了與陸地不同的環(huán)境因素,如鹽度、壓力、低溫和營(yíng)養(yǎng)等,而海洋微生物因長(zhǎng)期適應(yīng)復(fù)雜的海洋環(huán)境有其特有的代謝機(jī)制。膠州灣是半封閉型海灣,本文就膠州灣沉積物中細(xì)菌的多樣性及抑菌活性進(jìn)行了分析。
采用稀釋平板法通過(guò)YPD、Z2216E、高氏一號(hào)、M6培養(yǎng)基對(duì)膠州灣9個(gè)站點(diǎn)沉積物中的細(xì)菌進(jìn)行分離,共分離細(xì)菌208株,去重復(fù)后得76株。根據(jù)16SrDNA克隆測(cè)序結(jié)果初步判定菌株的分類(lèi)學(xué)地位,主要包括8個(gè)科11個(gè)屬的細(xì)菌:節(jié)桿菌屬
2、(Arthrobacter)、考克氏菌屬(Kocuria)、微球菌屬(Micrococcus)、微桿菌屬(Microbacterium)、假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas)、Oceanisphaera、海單胞菌屬(Marinomonas)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、硫胺素芽孢桿菌屬(Aneurinibacillus)、短芽孢桿菌屬(Brevibacillus),表明了膠
3、州灣沉積物微生物細(xì)菌種類(lèi)多樣性。
利用傳統(tǒng)活性篩選的方法篩選了分離菌株的抑菌活性,選用大腸桿菌(Escherichia coli)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)、白色假絲酵母(Candida albicans)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enter
4、obacter aerogenes)為指示菌,結(jié)果表明檢測(cè)的76株菌中有34菌株至少對(duì)一種指示菌有抑菌活性。另根據(jù)抑菌活性選取16株代表菌進(jìn)行次級(jí)代謝產(chǎn)物合成酶基因PCR篩選,檢測(cè)了PKSI、PKSII、halo、NRPS、PhzE、CYP、dTGD等基因,發(fā)現(xiàn)除PKSII、halo基因因某些原因未能成功擴(kuò)增出外,這16株菌均能檢測(cè)到其余一種功能基因,證明了膠州灣微生物產(chǎn)生物活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的潛力。
通過(guò)分子生物學(xué)鑒定、表型特
5、征及生理生化鑒定相結(jié)合的多相分類(lèi)鑒定法對(duì)LWYT0409、LWYT1014進(jìn)行了分類(lèi)鑒定,確認(rèn)菌株LWYT0409為芽孢桿菌屬甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌,LWYT1014為芽孢桿菌屬炭疽芽孢桿菌。
為進(jìn)一步對(duì)LWYT0409菌株抑菌化合物進(jìn)行研究,探索了該菌株抑菌化合物的理化性質(zhì)、分離條件、發(fā)酵條件等。結(jié)果表明該菌株的抑菌化合物具有較高的熱穩(wěn)定性,但對(duì)pH較敏感。嘗試了多種方法進(jìn)行抑菌化合物分離,如酸沉淀法、有劑溶液萃取法、薄層層析法
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