1、第一部分:機械預牽張可以抑制過度機械牽張所致肺泡Ⅱ型上皮細胞HMGB1的表達
　　目的:探討機械預牽張對過度機械牽張(Cyclic stretch，CS)所致肺泡Ⅱ型上皮細胞晚期炎性介質高遷移率族蛋白1(High mobility group box1， HMGB1)表達的影響。
　　方法:本實驗以肺泡Ⅱ型上皮細胞株（A549細胞）作為研究對象，采用Flexercell-4000作為細胞周期性機械牽張動力。實驗分為6組:對照

2、組（Ⅰ組）:常規(guī)培養(yǎng)，未進行機械牽張;機械牽張組（Ⅱ組）:給予A549細胞20％ CS6 h;15 min預牽張組（Ⅲ組）:給予5％ CS15 min后，隨后給予20％ CS6 h;30 min預牽張組（Ⅳ組）:給予5％ CS30min后，隨后給予20％ CS6 h;;60 min預牽張組（Ⅴ組）:給予5％ CS60min后，隨后給予20％ CS6 h;120min預牽張組（Ⅵ組）:給予5％CS120 min后，隨后給予20％CS6h。

3、所有細胞均用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)測定晚期炎性介質HMGB1表達;RT-PCR法測定HMGB1 mRNA及HMGB1受體mRNA表達;Western Blot法測定轉錄激活因子3(Signal transducer and activator oftranscription3，STAT3)磷酸化情況。
　　結果:與Ⅰ組比較，Ⅱ組A549細胞給予20％機械

4、牽張6h后晚期炎性介質HMGB1表達、HMGB1 mRNA表達、HMGB1受體mRNA及STAT3磷酸化水平明顯增加(P＜0.05)。與Ⅱ組比較，機械預牽張30、60、120 min時HMGB1表達、HMGB1 mRNA表達及STAT3磷酸化水平明顯明顯降低(P＜0.05)，尤以預處理60 min時效果最優(yōu)（P＜0.05）;HMGB1受體mRNA表達無明顯變化(P＞0.05)。
　　結論:機械預牽張可以抑制過度機械牽張所致的肺泡Ⅱ

5、型上皮細胞晚期炎性介質HMGB1的表達，其機制與抑制STAT3磷酸化有關。
　　第二部分:機械預牽張通過抑制SOCS3/STAT3通路激活減少過度機械牽張所致HMGB1表達
　　目的:探討細胞因子信號轉導抑制蛋白3(Suppressor of cytokine signaling3，SOCS3)/STAT3信號通路在機械預牽張抑制機械牽張所致肺泡Ⅱ型上皮細胞HMGB1表達中的作用。
　　方法:第一部分:A549細胞分為

6、5組，Control組（未轉染）;negative組(轉染陰性對照siRNA);siRNA-SOCS3-1組(轉染siRNA-SOCS3-1); siRNA-SOCS3-2組(轉染siRNA-SOCS3-2);siRNA-SOCS3-3組(轉siRNA-SOCS3-3)。RT-PCR法測定HMGB1mRNA表達。
　　第二部分:A549細胞分為4組，20％ CS組(予以A549細胞20％ CS6 h);20％ CS+5％CS+SO

7、CS3 siRNA組(SOCS3 siRNA轉染后，給予A549細胞5％ CS60 min，隨后給予A549細胞20％ CS6 h);20％ CS+5％ CS組(給予A549細胞5％ CS60 min，隨后給予給予A549細胞20％ CS6 h);20％ CS+5％ CS+negative-siRNA組(negative-siRNA轉染后，給予A549細胞5％ CS60 min，隨后給予A549細胞20％ CS6 h)。所有細胞均用EL

8、ISA法測定晚期炎性介質HMGB1表達;RT-PCR法測定HMGB1 mRNA表達;Western Blot法測定STAT3磷酸化情況。
　　結果:第一部分:與Control組比較，SOCS3 siRNA-1，SOCS3 siRNA-2及SOCS3 siRNA-3組轉染后的SOCS3 mRNA表達量均明顯降低（P＜0.05）。其中，SOCS3 siRNA-2組的mRNA表達量最低（P＜0.05）。第二部分:與20％ CS組比較，5

9、％ CS+20％ CS組HMGB1表達、HMGB1 mRNA表達及STAT3磷酸化均明顯降低(P＜0.05)。與5％ CS+20％ CS組相比，5％ CS+20％ CS+SOCS3 siRN組HMGB1表達、HMGB1 mRNA表達及STAT3磷酸化均明顯增加（P＜0.05），5％ CS+20％ CS+ negative-siRNA組HMGB1表達、HMGB1 mRNA表達及STAT3磷酸化均無明顯變化(P＞0.05)。
　　結論