1、本文從以下幾方面進行論述：
　　第一部分 篩選并鑒定單核細胞抗新生隱球菌免疫應答中關鍵性差異長鏈非編碼RNA
　　本部分將篩選在單核細胞抗新生隱球菌免疫應答中差異性表達的長鏈非編碼RNA(LncRNA)。通過密度梯度離心法分離健康人外周血單個核細胞，通過CD14磁珠分選試劑盒分離單核細胞。用熱滅活新生隱球菌刺激單核細胞12hr后，收集RNA，通過去核糖體二代測序技術篩選并鑒定其中關鍵性差異基因的表達譜，并用實時熒光定量PCR

2、驗證關鍵性LncRNA的表達情況。結果發(fā)現(xiàn)，與未刺激組相比，刺激組一共存在893個上調表達基因和349個下調表達基因;采用Gene Ontology分析，其中701個基因屬于Biological Process，698個基因屬于Molecular Function，751個基因屬于Cellular Component。與未刺激組相比，用熱滅活新生隱球菌刺激組中LncRNAPPP1R26-AS1表達明顯下降(P＜0.05)。納入在上海長海

3、醫(yī)院和上海長征醫(yī)院確診為新生隱球菌病患者(n=20)和同期入院體檢人員作為健康對照(n=20)，分離單個核細胞，經實時熒光定量PCR檢測PPP1R26-AS1的表達水平，結果顯示，與健康對照組相比，新生隱球菌病患者外周血單個核細胞中PPP1R26-AS1表達顯著增高(P＜0.05)，且與患者疾病嚴重程度相關。本部分結果提示PPP1R26-AS1可能通過影響患者單核細胞抗新生隱球菌免疫應答而參與發(fā)病機制。
　　第二部分 PPP1R2

4、6-AS1負向調節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導單核細胞促炎因子的產生
　　本部分將探討PPP1R26-AS1在單核細胞抗新生隱球菌免疫應答中的作用。構建PPP1R26-AS1過表達腺病毒載體，并轉染入健康人原代單核細胞。通過AgilentWhole Human Genome Oligo Microarray檢測系統(tǒng)對ADV-PPP1 R26-AS1、ADV-NC、BLANK組mRNA表達譜進行分析后，篩選其中與免疫相關信號通路有關的關鍵分

5、子并用實時熒光定量PCR進行驗證;進一步在新生隱球菌病患者和健康對照組外周血單個核細胞中檢測相關分子的蛋白表達情況。結果發(fā)現(xiàn)與對照組相比，ADV-PPP1R26-AS1組中IL-1B和CCL3水平明顯下降(P＜0.05)。與健康對照組相比，新生隱球菌病患者血清中IL-1B蛋白水平明顯下降(P＜0.05)，但CCL3差異無統(tǒng)計學意義。本部分結果提示PPP1R26-AS1可以抑制新生隱球菌誘導的單核細胞IL-1B的產生。
　　第三部分

6、 PPP1R26-AS1通過TLR2負向調節(jié)熱滅活新生隱球菌誘導單核細胞IL-1B的產生
　　本部分將探討PPP1R26-AS1對新生隱球菌誘導的單核細胞IL-1B產生的調控機制。采用實時熒光定量PCR檢測過表達PPP1R26-AS1對熱滅活新生隱球菌誘導的健康人原代單核細胞Toll樣受體相關分子的表達。采用實時熒光定量PCR及western blot檢測新生隱球菌病患者與健康對照組外周血單個核細胞中TLR2信號通路分子的水平。利

7、用TLR2功能獲得與缺失實驗，檢測熱滅活隱球菌誘導后單核細胞IL-1B的表達。結果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，ADV-PPP1R26-AS1組TLR2表達明顯下降(P＜0.05)。與健康對照組相比，TLR2、MyD88和TRAF6在新生隱球菌病患者中的表達顯著降低(P＜0.05)。拮抗健康人原代單核細胞TLR2后，熱滅活新生隱球菌誘導的單核細胞IL-1B表達被部分抑制;TLR2激動劑可以部分抵消PPP1R26-AS1對熱滅活新生隱球菌誘導的單核