1、目的:
　　增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(Proliferative Vitreoretinopathy，PVR)是視網(wǎng)膜脫離(Retinal detachment，RD)和玻璃體視網(wǎng)膜手術(shù)的嚴(yán)重并發(fā)癥，也是視網(wǎng)膜復(fù)位手術(shù)失敗的主要原因，最終造成視覺功能的嚴(yán)重?fù)p害。長鏈非編碼RNA(1ongnon-coding RNAs，lncRNAs)是一組長度大于200核苷酸序列(nucleotides，nt)不具有蛋白編碼功能的RNA轉(zhuǎn)錄本，在正

2、常的生理過程和很多疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)lncRNAs在很多眼科疾病中表達(dá)異常，然而lncRNAs與PVR之間的相關(guān)性至今沒有研究報(bào)道，本研究旨在探索lncRNAs在PVR發(fā)生發(fā)展中的作用及其臨床意義。
　　方法:
　　微陣列基因組芯片篩選PVR-ERMs中與PVR發(fā)生相關(guān)的lnc-RNAs(與白內(nèi)障術(shù)后繼發(fā)性ERMs相比)，qRT-PCR隨機(jī)驗(yàn)證其中11條表達(dá)量改變超過2倍的lncRNAs，篩選出與PV

3、R密切相關(guān)的lncRNA，作為PVR的研究靶點(diǎn)。進(jìn)一步收集臨床標(biāo)本，qRT-PCR比較PVR-ERMs、白內(nèi)障術(shù)后繼發(fā)性ERMs和眼外傷患者正常視網(wǎng)膜組織中靶點(diǎn)lncRNA的表達(dá)情況;并將靶點(diǎn)lncRNA的表達(dá)情況和PVR標(biāo)記物血小板源性生長因子A(Platelet-Derived Growth Factor，PDGFA)、血小板源性生長因子C（Platelet-Derived Growth Factor，PDGFC）、激肽原1(Kin

4、inogen1，KNG1)和Collagen I的表達(dá)情況做比較;隨后qRT-PCR分別檢測了三組標(biāo)本中l(wèi)ncRNA-MIAT、RNCR3和TUG1的表達(dá)水平，再次驗(yàn)證靶點(diǎn)lncRNA的選擇。與此同時(shí)，qRT-PCR比較不同病理分級PVR患者血漿和血細(xì)胞中靶點(diǎn)lncRNA的表達(dá)情況。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，通過原味雜交的方法檢測靶點(diǎn)lncRNA在視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(Retinal Pigment Epithelial，RPE)中的表達(dá)情況。通過siR

5、NA轉(zhuǎn)染的方法下調(diào)RPE細(xì)胞中靶點(diǎn)lncRNA的表達(dá)，并分別給予TNF-α/PDGF-A/IGF-1刺激，MTT檢測各組細(xì)胞的細(xì)胞活力，臺盼蘭染色檢測細(xì)胞的增殖情況及死細(xì)胞的數(shù)量，JC-1染色檢測細(xì)胞的早期凋亡情況，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力。
　　結(jié)果:
　　通過微陣列基因分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)，與白內(nèi)障術(shù)后繼發(fā)性ERMs相比，PVR-ERMs中有78條與PVR發(fā)生相關(guān)的lncRNAs，其中表達(dá)上調(diào)的有48條lncRNAs，表達(dá)下調(diào)

6、的有30條lncRNAs。通過qRT-PCR的方法隨機(jī)驗(yàn)證了其中11條表達(dá)量改變超過2倍的lncRNAs，并且3種肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript1，MALAT1)的基因探針檢測均發(fā)現(xiàn)，MALAT1在PVR-ERMs中表達(dá)量明顯上調(diào)。因此我們初步選擇MALAT1作為我們的研究靶點(diǎn)。
　　進(jìn)一步收集臨床標(biāo)本，通過qRT-PCR的方法比較P

7、VR-ERMs、白內(nèi)障術(shù)后繼發(fā)性ERMs和眼外傷患者正常視網(wǎng)膜組織中MALAT1的表達(dá)情況，結(jié)果表明:與白內(nèi)障術(shù)后繼發(fā)性ERMs和眼部外傷的正常視網(wǎng)膜組織相比，PVR-ERMs中MALAT1的表達(dá)明顯上調(diào);PDGFA、PDGFC、KNG1和Collagen I等PVR的標(biāo)記物在PVR-ERMs中表達(dá)水平也明顯上調(diào)，與MALAT1的上調(diào)趨勢一致;并且，lncRNA-MIAT、RNCR3和TUG1的表達(dá)水平在三組臨床標(biāo)本中沒有明顯差異。進(jìn)一

8、步驗(yàn)證MALAT1可以作為PVR的研究靶點(diǎn)。
　　接著，通過qRT-PCR的方法檢測PVR患者外周血中MALAT1的表達(dá)情況，結(jié)果表明:與正常健康者相比，PVR患者血漿和血細(xì)胞中MALAT1的表達(dá)量均明顯上調(diào)，且上調(diào)程度與PVR的嚴(yán)重程度成正相關(guān)。而完成手術(shù)治療4個(gè)月且未復(fù)發(fā)的PVR患者，其血漿和血細(xì)胞中MALAT1的表達(dá)量明顯減少。
　　細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過原位雜交的方法檢測發(fā)現(xiàn)MALAT1主要表達(dá)于RPE細(xì)胞的細(xì)胞核。通過q

9、RT-PCR方法檢測發(fā)現(xiàn)MALAT1 siRNA能使RPE細(xì)胞中MALAT1的表達(dá)下調(diào)約80％。MTT、臺盼藍(lán)和JC-1染色的方法表明:給予TNF-α/PDGFA/IGF-1刺激后，RPE的細(xì)胞活力增加、增殖能力增強(qiáng)，但下調(diào)MALAT1表達(dá)后RPE的細(xì)胞活力下降、增殖能力減弱，死細(xì)胞數(shù)及早期凋亡增加;過劃痕實(shí)驗(yàn)表明，給予TNF-α/PDGF-A/IGF-1刺激后，RPE細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)，但下調(diào)MALAT1表達(dá)后，RPE細(xì)胞的遷移能力下