TGF-β1對(duì)食管癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的調(diào)控研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor-β,TGF-β1)在食管癌中的作用及其對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的調(diào)控。
  方法:利用TGF-β1受體抑制劑 LY2109761處理食管癌Eca109細(xì)胞,根據(jù)濃度梯度(0、0.1、1、10μm/ml)分為四組;慢病毒轉(zhuǎn)染 TGF-β1干擾 RNA(siRNA)處理食管癌 Eca109細(xì)

2、胞,分為3組:實(shí)驗(yàn)組(病毒穩(wěn)定 TGF-β1 siRNA轉(zhuǎn)染 Eca109細(xì)胞)、陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)序列 Eca109細(xì)胞)、空白對(duì)照組(正常未經(jīng)任何處理的Eca109細(xì)胞),采用熒光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR,qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)TGF-β1及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)指標(biāo) E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、鋅指轉(zhuǎn)錄因子(Snail)在mRNA水平表達(dá)情況;W

3、estern blot技術(shù)檢測(cè)E-cadherin、Vimentin蛋白水平的表達(dá);同時(shí)通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及 Transwell法分別檢測(cè)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的變化情況。
  結(jié)果:通過(guò) TGF-β1受體抑制劑(0、0.1、1、10μm/ml)處理 Eca109細(xì)胞后,在 mRNA水平 TGF-β1表達(dá)逐漸降低,E-cadherin表達(dá)逐漸升高,Vimentin、Snail表達(dá)逐漸降低(P<0.05);在蛋白

4、水平,E-cadherin表達(dá)逐漸升高,Vimentin表達(dá)逐漸降低(P<0.05);此外,細(xì)胞增殖和遷移能力逐漸降低(P<0.05)。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染TGF-β1 siRNA后發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,TGF-β1 mRNA表達(dá)降低(P<0.05),E-cadherin表達(dá)增高,Vimentin表達(dá)降低;同時(shí)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力均降低(P<0.05)。
  結(jié)論: TGF-β1可能通過(guò)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)食管

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