1、蛋白質脯氨酸前的絲氨酸或蘇氨酸的可逆磷酸化是一種重要的細胞信號調控機制。近來發(fā)現的肽基脯氨酰順反異構酶Pinl能特異地識別和結合蛋白質磷酸化的絲/蘇-脯氨酸基序，催化磷酸化的絲/蘇-脯氨酸肽鍵發(fā)生順反異構，從而改變磷酸化蛋白質的功能。越來越多的研究數據表明這種構型的改變影響了蛋白質的催化活性、去磷酸化水平、蛋白質與蛋白質之間的相互作用、蛋白質的亞細胞定位及蛋白的轉運等。而且，這種磷酸化后的調節(jié)機制在細胞生長和疾病發(fā)生如癌癥和阿爾茨海默氏

2、病中起重要作用。但目前對于Pinl的這種催化調節(jié)機制、以及其與底物相互作用的研究還很少。 本文主要對人類Pinl蛋白及Pinl的兩個關鍵結構域中的幾個關鍵氨基酸Trp34、Lys63、Cys113、Met130進行定點突變，我們對這些蛋白進行了大量表達、分離、純化，然后用懸吊液滴蒸汽擴散法制備得到晶體，通過回擺法收集衍射數據并進行晶體結構解析。目前我們得到了Human Pinl-WT、Pinl-W34A、Pinl-K63A、Pi

3、nl-C113A、Pinl-M130A。研究結果表明突變體Pinl-W34A對底物磷酸化特異性的識別能力及在體外的催化功能均喪失，而突變體Pinl-K63A、Pinl-C113A其底物磷酸化特異性識別功能不受影響，但它的催化功能喪失；同時，從Pinl-K63A、Pinl-C113A和Pinl-M130A中我們發(fā)現PPIase結構域可能存在兩個磷酸根結合位點。同時我們成功克隆、表達了只含有PPIase結構域的擬南芥Pinl(AtPinl)