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![超聲改性裂褶多糖制備及免疫調(diào)節(jié)活性研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/2d705ee0-3db1-48ca-87e6-457e6e54a656/2d705ee0-3db1-48ca-87e6-457e6e54a6561.gif)
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文檔簡介
1、裂褶多糖(SPG)是裂褶菌子實體、菌絲體或發(fā)酵液中提取出來的水溶性胞外多糖,具有增強免疫力和抗腫瘤的功效。但天然SPG分子量大(>106 Da),粘度較大,制約其應(yīng)用。本文采用超聲工藝對固體發(fā)酵SPG進行降解處理,得到不同分子量的超聲裂褶多糖(USPG)級分;對這些USPG級分的初級結(jié)構(gòu)和流變性質(zhì)開展研究,并通過體外和體內(nèi)動物實驗的方法研究其免疫及抗腫瘤活性。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
考察超聲處理對制備不同分子量裂褶多糖的影響
2、,結(jié)果表明,隨超聲時間和強度增強SPG的分子量逐漸降低,降解動力學(xué)符合降解二級動力學(xué)模型。最終選定降解超聲參數(shù):時間10 min,超聲強度796 W/cm2。同時結(jié)合乙醇分級沉淀和透析,最終得到3個USPG級分,USPG40、USPG60、USPG80,分子量分別集中在106-107 Da、105-106Da、104-105 Da,樣品純度分別為93.15%、90.56%、88.77%,單糖組成主要為葡萄糖,樣品均一性較好。
3、通過紅外光譜和甲基化分析進行研究,結(jié)果表明超聲處理并未改變糖鏈類型和鏈接方式。流變特性分析結(jié)果表明,SPG為假塑性流體,濃度升高到10 mg/ml時表現(xiàn)為固體特性(儲能模量G,>損耗模量G")。超聲處理后USPG40表現(xiàn)假塑性流體行為,而USPG60、USPG80表現(xiàn)出牛頓流體行為。對比同濃度下(5 mg/ml)裂褶多糖溶液,經(jīng)過超聲處理的USPG40在角頻率為1.1 s-1時表現(xiàn)出黏性行為(儲能模量G'<損耗模量G"),USPG60在
4、較低角頻率0.05 s-1以后,表現(xiàn)出黏性行為,USPG80則完全表現(xiàn)出黏性行為。
通過體外實驗的方法對SPG及USPG級分的免疫及抗腫瘤功效進行研究。結(jié)果表明SPG組和USPG各級分(25-600μg/ml)對促進脾淋巴細胞增殖、巨噬細胞RAW264.7的NO釋放和抑制乳腺癌細胞T-47D活性具有良好的功效。相比SPG,USPG級分具有更高的活性,USPG60的脾淋巴細胞增殖、巨噬細胞RAW264.7的NO釋放和抑制乳腺癌細
5、胞T-47D活性最佳。
采用體內(nèi)模型進一步評價SPG和USPG級分的免疫及抗腫瘤功能。SPG和USPG級分的含多糖血清均可增強正常大鼠免疫功能,其中濃度20%的USPG60含多糖血清組對脾淋巴細胞增殖的促進作用最強,血清中免疫因子IL-2(169.85 pg/ml)和TNF-α(85.62 pg/ml)含量最高。S180荷瘤小鼠的研究實驗表明,SPG和USPG級分均可顯著增強荷瘤小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)、促進LPS誘導(dǎo)的B
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