1、目的：通過(guò)觀察支氣管哮喘豚鼠模型中性粒細(xì)胞中 KLF2、S1PR1的表達(dá)情況，探討KLF2與S1PR1對(duì)支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞的遷移的影響，從而為支氣管哮喘的防治提供新的思路。
　　方法：隨機(jī)將30只豚鼠分為正常對(duì)照組、哮喘組、哮喘治療組，每組各10只；模型組及治療組通過(guò)用10％OVA及FCA致敏，1%OVA霧化激發(fā)誘導(dǎo)成支氣管哮喘模型，治療組在霧化激發(fā)前腹腔注射地塞米松治療，對(duì)照組用生理鹽水替代OVA與模型組同步實(shí)驗(yàn)。通過(guò)觀察

2、各組豚鼠霧化激發(fā)后的癥狀變化及肺組織的病理學(xué)改變，并比較各組血及肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)，應(yīng)用肺功能檢測(cè)各組豚鼠的氣道阻力變化。分離各組豚鼠血中性粒細(xì)胞，采用 Transwell小室檢測(cè)各組血中性粒細(xì)胞遷移情況，Realtime PCR、Western-blot分別檢測(cè)各組豚鼠血中性粒細(xì)胞中KLF2、S1PR1 mRNA和蛋白的表達(dá)，ELISA檢測(cè)各組肺泡灌洗液及血清中 S1P的蛋白表達(dá)情況，免疫熒光檢測(cè)KLF2在各組豚鼠血中

3、性粒細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)及定位。
　　結(jié)果：1.支氣管哮喘動(dòng)物模型的成功構(gòu)建
　?。?）各組豚鼠霧化激發(fā)后體征變化的觀察：在OVA霧化激發(fā)期間發(fā)現(xiàn)哮喘組豚鼠出現(xiàn)明顯的呼吸頻率增快、前爪抓鼻、點(diǎn)頭呼吸、打噴嚏、咳嗽及腹肌抽搐等典型的哮喘樣癥狀，治療組豚鼠也出現(xiàn)上述癥狀但程度較哮喘組明顯減輕，正常對(duì)照組無(wú)異常反應(yīng)。
　?。?）氣道阻力的測(cè)定：哮喘組豚鼠的氣道阻力隨著乙酰甲膽堿濃度的升高而增加，與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

4、<0.01）；哮喘治療組與哮喘組比較在各濃度刺激下的氣道阻力水平下降（P<0.01）。
　　（3）肺組織的病理學(xué)觀察結(jié)果：正常對(duì)照組顯示支氣管、肺泡及肺組織結(jié)構(gòu)完整，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少；哮喘組豚鼠顯示支氣管重塑，管腔變狹窄，肺泡及肺組織結(jié)構(gòu)破壞，管腔內(nèi)可見(jiàn)較多粘液栓及粘膜皺褶增生、平滑肌細(xì)胞明顯增厚及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等典型的病理學(xué)改變，其中以中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)最明顯；治療組基底膜、平滑肌層仍有增厚，但支氣管粘膜水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯好轉(zhuǎn)。

5、
　　（4）各組豚鼠BALF液中細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)：哮喘組豚鼠細(xì)胞總數(shù)（124.69±7.40、45.07±2.99）及NEU%（22.05±1.57、5.04±1.07）顯著高于正常組（P<0.01），治療組較哮喘組細(xì)胞總數(shù)（88.29±7.77、124.69±7.40）及NEU%（15.11±1.33、22.05±1.57）下降（P<0.01）。（5）各組豚鼠血白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：哮喘組豚鼠血NEU%顯著高于正常組（67.04±5

6、.56、30.74±6.02，P<0.01），治療組較哮喘組NEU%下降（46.90±5.25、67.04±5.56，P<0.01）。
　　2.各組豚鼠血中性粒細(xì)胞KLF2表達(dá)及定位、KLF2mRNA和蛋白表達(dá)情況
　　免疫熒光、Real-time PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，各組豚鼠血中性粒細(xì)胞中KLF2平均光密度、KLF2 mRNA及蛋白表達(dá)量：哮喘組<哮喘治療組<正常組（P均<0.01）。
　　

7、3.各組豚鼠血清及肺泡灌洗液中S1P表達(dá)情況
　　ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，各組豚鼠血清及肺泡灌洗液中S1P表達(dá)：哮喘組>哮喘治療組>正常組（P均<0.01）。
　　4.各組豚鼠血中性粒細(xì)胞S1PR1 mRNA和蛋白表達(dá)變化
　　Real-time PCR及Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，各組豚鼠血中性粒細(xì)胞S1PR1 mRNA及蛋白表達(dá)量：哮喘組>哮喘治療組>正常組（P均<0.01）。
　　5.遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

8、各組豚鼠中性粒細(xì)胞的遷移情況
　　根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取0.1uM濃度時(shí)的S1P進(jìn)行Transwell實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，各組豚鼠血中性粒細(xì)胞遷移率：哮喘組>哮喘治療組>正常組（P均<0.01）。
　　6.KLF2與S1PR1mRNA及蛋白做Pearson相關(guān)分析，結(jié)果提示二者之間呈負(fù)相關(guān)。
　　7.KLF2、S1PR1蛋白與各組哮喘豚鼠模型中性粒細(xì)胞遷移率做
　　Pearson相關(guān)分析，結(jié)果提示KLF2與中性粒細(xì)胞遷移

9、率呈負(fù)相關(guān)，S1PR1與中性粒細(xì)胞遷移率呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞KLF2表達(dá)減少，S1PR1表達(dá)上調(diào)，經(jīng)地塞米松治療后KLF2表達(dá)較哮喘組上升，S1PR1表達(dá)較哮喘組下降。
　　2.支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞中KLF2與S1PR1呈負(fù)相關(guān)性。
　　3.支氣管哮喘豚鼠中性粒細(xì)胞中KLF2可能通過(guò)減弱中性粒細(xì)胞的遷移而發(fā)揮抗炎作用。
　　4.在支氣管哮喘豚鼠模型中，趨化因子S1P與