馬肝醇脫氫酶基因的克隆表達(dá)及活性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文馬肝醇脫氫酶基因的克隆表達(dá)及活性研究姓名：韓云波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物與生化藥學(xué)指導(dǎo)教師：張怡軒陳代杰20090501沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractAbstractInthisstudytwohorseliveralcoholdehydrogenaseisoenzymegenes(hladh—eandhladhs)wereamplifiedfromhorseliverwithRTPCRmetho

2、dAseriesofnewplasmidspLY105E／S，pLYl07E／S，pLYl08E／S，pLYl09E／S，pLYl10E／SandpLYl15E／Swereconstructedbyligatinghladh—e／sgenesintotheexpressionplasmidvectorpET30apET20b()，pkk223—3andpTrc99aAfterthesenewplasmidsweretransformed

3、toEcoliBL21(DE3)，therecombinantstrainswereincubatedinLBmediumat37℃，andtheninduced嘶nlIPTGatthefinalconcentrationoflmmolfor4hwhentheOD600reached0608Activitiesofbothrecombinanthorseliveralcoholdehydrogenaseisoenzymes(HLADHE

4、，HLADH—S)werestudiedInadditionthetwogeneswereclonedintoPichiapastorisexpressionvectorpPIC9，andinitialexpressionwascarriedoutafterintegratedintothegenomeofthePichiapastorisGSl15ThereWasaonebasedifferenceinamplifiedgeneshl

5、adh—eandhladh—Sfromthatreportedintheliterature，whereastheaminoacidsequencewereidenticalFurthermore，therecombinantexpressionplasmidspLYl05E／S，pLYl06E／S，pLYl07E／S，pLYl08E／S，pLYl09E／S，pLYl10E／SandpLYll5E／Swereconstructedand

6、inducedComparativelytherecombinantproteinHLADH—E／SexpressedinEcoliBL21(DE3)pLY109E／SwereofthebestWhenthestrainswereculturedinLBcultureunder30“CreachingaOD600valueatabout06，high—levelexpressionofHLADH—E／SWasavailablefollo

7、winglmmol／LIPTGinductionfor4hTheamountofHLADHE／Sanditsactiveproteinaccountfor20％ofallsolubleproteinsThesolublepartsofHLADHE／SwerepurifiedusingNickelcolumnTheoptimalreactiontemperature，optimalreactiontime，optimalreactions

8、ubstrateconcentrationandtheconcengationofcoenzymeweredeterminedVitalityofpurifiedenzymereached104103U／mgandtheseenzymesandtheirenzymaticprocessescouldbeappliedinindustrialproductionafterfurtherdevelopmentKeyword：horseliv

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