扁桃酸消旋酶和扁桃酸脫氫酶基因的克隆及表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、苯乙酮酸(PGA),又稱苯甲酰甲酸(BFA),是應(yīng)用廣泛的有機(jī)合成中間體??梢杂脕砗铣啥喾N醫(yī)藥和農(nóng)藥。通過與金屬元素絡(luò)合,又發(fā)現(xiàn)它可作為熒光材料的敏化劑和有機(jī)氧化反應(yīng)的催化劑,更加引起人們的重視。 扁桃酸消旋酶(MR)和扁桃酸脫氫酶(MDH)是微生物體內(nèi)代謝扁桃酸生成苯乙酮酸的兩個關(guān)鍵酶。根據(jù)研究結(jié)果,以扁桃酸為唯一碳源篩選得到具有高效轉(zhuǎn)化扁桃酸活性的菌株,對其中活性較高的62號菌進(jìn)行了菌種生理生化及16S rDNA的鑒定工作

2、,證明是銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。實驗表明62號菌能同時轉(zhuǎn)化R-及S-扁桃酸,是一株可作為克隆扁桃酸消旋酶基因(mdlA)和扁桃酸脫氫酶基因(mdlB)的理想菌株。 以62號菌染色體DNA為模板,PCR擴(kuò)增獲得mdlA+mdlB基因全長;PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后與T載體相連,構(gòu)建克隆載體pT-mdlA+mdlB:pT-mdlA+mdlB經(jīng)NdeⅠ/NotⅠ雙酶切后將目的基因插入pET30a(+)載

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