1、研究背景及目的：
　　據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）規(guī)定，育齡夫婦正常性生活一年以上，并且在未采取任何避孕措施的條件下，仍然無法生育的稱為不孕癥。雖然成功受孕但因各種原因?qū)е铝鳟a(chǎn)、死胎而依然不能使嬰兒最終存活的也一并稱為不育癥。一般把婚后2年以上由于男性方面原因造成女方不孕者稱為男性不育癥。近年來由于環(huán)境污染以及遺傳因素的影響，不孕不育癥已經(jīng)與心血管疾病、腫瘤并列成為影響當今人類生活健康的三大主要疾病。近來，越來越多的育齡夫婦遭受到男性

2、不育的困擾。據(jù)有關資料統(tǒng)計，已婚夫婦中有10％—15%的夫婦為不孕不育，其中由男性原因引起的約占30%—50%。男性不育癥主要表現(xiàn)在生精障礙方面，病因多且復雜，如外傷、梗阻、睪丸發(fā)育不良、生殖系統(tǒng)感染、內(nèi)分泌或免疫性疾病、服用激素藥物或腫瘤藥物、不良生活習慣、環(huán)境毒物以及遺傳因素等等。另有少數(shù)導致男性不育的原因并不能給出基于分子水平的合理解釋，被稱為特發(fā)性男性不育，這其中約有50﹪是由遺傳因素造成的。大量研究發(fā)現(xiàn)，男性不育與染色體異常、

3、Y染色體微缺失及相關基因的突變均有很高的相關性。
　　1976年，Tiepol等人發(fā)現(xiàn)存在Y染色體長臂遠端微缺失的現(xiàn)象有6例患者，繼而猜測在該區(qū)域可能存在控制精子發(fā)生的相關基因，因此將此區(qū)域命名為無精子癥基因即AZF。更多的學者隨后投身于對該區(qū)域的研究從而得出結(jié)論AZF區(qū)微缺失與生精障礙有重要關系?；谶@一結(jié)論，如欲研究基因多態(tài)性與男性不育的相關關系，須先排除Y染色體AZF區(qū)微缺失的影響。
　　L.Lazaros等對希臘人群

4、進行研究發(fā)現(xiàn)雄激素受體基因的(CAG)n和SHBG（Sex hormone binding globulin,SHBG）基因的(TAAAA)n的重復數(shù)目在精子的發(fā)生中起著很大的作用，并進一步影響了精子的存活數(shù)以及存活質(zhì)量。Mohammad Reza Safarinejad等研究發(fā)現(xiàn)SHBG基因與男性少弱精癥有關。
　　有研究在人類肝母細胞瘤細胞中進行體外瞬時轉(zhuǎn)染試驗發(fā)現(xiàn)攜帶較長重復等位基因(TAAAA) n的個體SHBG水平顯著低

5、于攜帶較短重復等位基因的個體，說明SHBG啟動子的轉(zhuǎn)錄活性可能與(TAAAA) n重復數(shù)有關。Cousin[40][13]等人的研究指出，在法國多毛女性人群中，含有6個的患者與含有9個的患者相比，其血清的 SHBG水平較高，而含有8個的患者其血清的 SHBG水平位于前兩者之間。Vanbillemont等也進行了研究，得出結(jié)論攜帶6次（TAAAA） n重復數(shù)的男性血清SHBG濃度比未攜帶者血清中SHBG的濃度高，并且指出純合子比雜合子擁有

6、更高的血清SHBG水平。在2007年Ferk等人經(jīng)過大量研究也得出相似的結(jié)論：無論是多囊卵巢綜合征患者還是健康成年女性，凡攜帶長等位基因（TAAAA）n的個體都表現(xiàn)出較低的SHBG水平。
　　近年來許多研究表明，SHBG水平和男性不育有相關性。Wood等研究發(fā)現(xiàn)，不同長度（TAAAA）重復等位基因攜帶者的SHBG水平不同，繼而影響男性精子發(fā)生和精液質(zhì)量；Eriksson AL等把（TAAAA）重復數(shù)作為連續(xù)參數(shù)進行分析，研究表明在

7、青年及老年男性中，（TAAAA）等位基因重復數(shù)和男性SHBG水平間存在相關性；2008年L.Lazaros等人報道指出SHBG基因多態(tài)性與男性精液質(zhì)量有關。2010年Reza Safarinejad等人發(fā)現(xiàn)，SHBG基因（TAAAA）n多態(tài)性和Asp327Asn多態(tài)性與循環(huán)血液中SHBG的濃度及自發(fā)性男性不育有相關關系。而關于SHBG基因啟動子中（TAAAA）n重復多態(tài)性與男性不育的相關性研究國內(nèi)未見報道。
　　故本課題擬對SHB

8、G基因啟動子（TAAAA）n多態(tài)性進行研究，分析其多態(tài)性與河南漢族人群男性不育是否存在相關關系。首先本課題為研究對象進行Y染色體AZF區(qū)域微缺失檢測，采用多重聚合酶鏈式反應（Mutiplex Polymerase chain reaction Mutiplex PCR）技術，以AZF微缺失作為排除標準，對納入的研究對象利用變性聚丙烯酰氨凝膠電泳技術對河南漢族人群SHBG基因的啟動子（TAAAA）n多態(tài)性進行相關分析，擬找出其多態(tài)性在河南

9、漢族人群中的分布情況，進而得出其與男性不育的相關性，能更好的為男性不育的臨床檢測與治療提供準確可靠的理論依據(jù)。
　　研究對象：
　　1．病例組
　　采集自2013年1月—2013年6月因不孕不育問題來鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖中心及檢驗科門診就診的288例患者，年齡在22-45歲（平均年齡32.4±6.4歲）的男性。經(jīng)過正規(guī)檢查，排除肝臟腎臟疾病、慢性病如糖尿病高血壓、睪丸因素疾病、染色體異常及缺失、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、生殖

10、器相關疾病等病癥以及服用抗腫瘤藥物等情況,要求患者均經(jīng)過至少兩次精液常規(guī)檢查，并且是按照標準化操作規(guī)程進行的,經(jīng)確診為無精子或少精子病的患者作為研究對象(精子密度＜20×106/mL)。所有受試者均為河南地區(qū)漢族人，且同意并已簽署知情同意書。
　　2．對照組
　　隨機抽取正常生育至少一個孩子并且身體健康無肝腎、糖尿病、高血壓等的男性血液樣本259例做為正常對照組，年齡在24-45歲（平均年齡32.8±6.7歲），對象均為河南

11、地區(qū)漢族人，且均已簽署知情同意書。另以無菌雙蒸水作為空白對照。
　　研究方法：
　　采用常規(guī)經(jīng)典的酚-氯仿法，分別從病例組的血液和對照組的血液中提取DNA，PCR擴增目的片段，進行Y染色體微缺失檢測，再用6%的聚丙烯酰胺凝膠電泳對無缺失樣本的目的片段進行SHBG基因啟動子（TAAAA）n基因型的檢測，觀察并記錄分析。
　　統(tǒng)計學處理：
　　采用χ2檢驗和獨立樣本t檢驗，比較病例組和對照組由于基因型、等位基因頻率等

12、相關因素在其中的分布差異性而男性不育的相關危險度則采用比值比(odds ratio,OR)及其95%可信區(qū)間(confidence interval，CI)來表示并嚴格控制其他干擾因素因素對結(jié)果的影響。使用HWE軟件檢驗Hardy-Weinberg平衡對于對照組和病例組的基因型分布是否足以用樣本代表總體。所有統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)概率檢驗,概率以P＜0.05作為顯著性差異指標。統(tǒng)計軟件為SPSS17.0和HWE1.20。
　　結(jié)果：

13、r>　　1．病例組288例中檢測出35例Y染色體微缺失，缺失率為12.15%。對照組中未檢出。
　　2．檢測到(TAAAA)5～10次重復6個等位基因及5/5、5/6、5/7、5/8、5/9、6/6、6/7、6/8、6/9、6/10、7/7、7/8、7/9、7/10、8/8、8/9、8/10、9/9、9/10、10/10等20種基因型
　　3．在病例組和對照組中，樣本的SHBG基因型頻率都符合Hardy-Weinberg平衡

14、，表明選取樣本可靠，其具有很好的代表性。
　　4．SHBG基因啟動子(TAAAA)n多態(tài)性中等位基因頻率差異在病例組和對照組的對比中具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　5．SHBG基因啟動子(TAAAA)n多態(tài)性研究中，當 n=5、6、7、10時，兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P＜0.0083）;n=9為危險因素（P＜0.0083，OR=1.68，95%CI：1.30-2.17）；n≥9時顯著增加了不育的風險（P＜0.01，OR