1、宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第四位常見惡性腫瘤，2012年全球共有宮頸癌528000例，死亡266000例，85％發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家[1]，也是嚴(yán)重威脅我國(guó)婦女健康的主要惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之首。近年來隨著我國(guó)女性宮頸癌篩查工作的明顯加強(qiáng)，使其死亡率有所下降，但每年仍有約12萬新發(fā)病例[2]。因此，如何進(jìn)一步擴(kuò)大篩查面，同時(shí)提高篩查質(zhì)量、特異性、敏感性，開發(fā)新的預(yù)測(cè)性指標(biāo)很有必要。目前臨床上廣泛使用的宮頸病變篩查手段主要有

2、人乳頭瘤病毒檢測(cè)(HPV)、液基細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)及陰道鏡檢查等，但這些檢查都有相應(yīng)的缺點(diǎn)和不足。因而，從早診早治出發(fā)，臨床上需要其它更可靠指標(biāo)或手段來協(xié)助進(jìn)行綜合判斷，使宮頸癌的早期篩查更準(zhǔn)確、更可靠，并更有預(yù)見性。
　　研究顯示，多種癌癥及癌前病變的組織中可檢測(cè)到端粒酶活性的高表達(dá)，且端粒酶活性與病變程度呈正相關(guān)[3]。宮頸癌變需經(jīng)歷宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(Cervicalintraepithelial neoplasia，CI

3、N)、早期浸潤(rùn)癌、浸潤(rùn)癌等階段，歷時(shí)長(zhǎng)達(dá)10余年，在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展的過程中，是否伴有端粒酶活性的增加，端粒酶相關(guān)組分的表達(dá)程度如何變化，端粒酶相關(guān)檢測(cè)方法及指標(biāo)是否可運(yùn)用到臨床，其臨床診斷效能又如何呢？
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)擬檢測(cè)人端粒酶RNA組分(hTERC基因)及人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT蛋白)在CIN及宮頸鱗癌中的表達(dá)情況，并將檢測(cè)指標(biāo)與常規(guī)宮頸疾病篩查手段比較，了解其在篩查中的診斷效能，以期為臨床尋求更有效的

4、宮頸病變篩查方案。
　　方法：
　　一、收集2012-2014就診于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院、盛京醫(yī)院及遼寧省腫瘤醫(yī)院婦科并經(jīng)病理確診的患者，共140例，其中正常宮頸對(duì)照組20例，宮頸低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)病例20例，宮頸高度上皮內(nèi)病變(HSIL)71例，宮頸鱗癌29例。統(tǒng)計(jì)所有患者的TCT結(jié)果及HPV檢查結(jié)果，并收集TCT殘留液及宮頸病理組織。
　　二、應(yīng)用熒光原位雜交(FISH)方法檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞中hTE

5、RC基因的擴(kuò)增情況。
　　三、應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)宮頸組織TERT蛋白的表達(dá)。
　　四、應(yīng)用SPSS17.0將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　一、FISH法檢測(cè)hTERC基因在宮頸脫落細(xì)胞中的擴(kuò)增:hTERC基因在正常宮頸、LSIL、HSIL及宮頸鱗癌組中的擴(kuò)增率分別為0％、15％、59.2％及96.6％。采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，正常組與LSIL組，p＞0.05，兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;LSIL組與HSI

6、L組，p＜0.05，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;HSIL組與宮頸鱗癌組，p＜0.05，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。hTERC基因擴(kuò)增量隨著病變的嚴(yán)重程度而呈現(xiàn)逐漸遞增、擴(kuò)增類型逐漸增多，多倍體高水平擴(kuò)增比例增大。
　　二、免疫組化檢測(cè)TERT蛋白在宮頸組織中的表達(dá):TERT蛋白染色表現(xiàn)為細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)著色。TERT蛋白表達(dá)呈明顯的分層現(xiàn)象:在正常子宮頸鱗狀上皮及LSIL組中，TERT蛋白不表達(dá)或少量陽(yáng)性細(xì)胞散在分布于子宮頸鱗狀上皮的基底層及上

7、皮下1/3;在HSIL組，陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)到上皮層的下2/3或達(dá)全層;宮頸鱗癌組中大部分癌細(xì)胞都呈陽(yáng)性表達(dá)。TERT蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為:正常宮頸5％（1例），LSIL組15％（3例），HSIL組66.2％（47例），宮頸鱗癌組96.6％（28例），TERT蛋白表達(dá)在LSIL與HSIL之間、HSIL與宮頸鱗癌組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，但在正常組與LSIL組之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05）。TERT評(píng)分隨著病變的嚴(yán)重程度而

8、呈現(xiàn)逐漸遞增，組間差異明顯。
　　三、hTERC基因、TERT蛋白及HR-HPV的相關(guān)性:一致性檢驗(yàn)顯示hTERC基因擴(kuò)增與TERT蛋白表達(dá)兩指標(biāo)表達(dá)一致，Kappa=0.798，p＜0.001。相關(guān)性檢驗(yàn)顯示三者表達(dá)呈正相關(guān)，p＜O.01。
　　四、宮頸鱗癌病例中hTERC、TERT表達(dá)與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系:宮頸鱗癌組中，不同臨床分期及分化程度的病例，hTERC基因擴(kuò)增及TERT蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在無明顯組間差異，但hTER

9、C基因擴(kuò)增量及TERT蛋白評(píng)分組間差異明顯，晚期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例的hTERC基因擴(kuò)增量明顯增多，TERT蛋白表達(dá)免疫組化評(píng)分也明顯升高。
　　五、診斷試驗(yàn)評(píng)價(jià)及ROC曲線分析:TCT、HPV、hTERC基因及TERT蛋白診斷宮頸病變的靈敏度分別為74.8％、63.1％、71.8％及74.8％，特異度為81.1％、86.5％、97.3％及94.6％，ROC曲線下面積分別為:0.779，0.748，0.846，0.847。TC

10、T+TERT及TCT+hTERC篩查方案，靈敏度為90.3％及86.8％，較TCT或HPV檢查明顯提高，而漏診率顯著降低，診斷效能較高。
　　結(jié)論：
　　一、hTERC基因擴(kuò)增及TERT蛋白表達(dá)隨著宮頸病變程度的加重而逐漸升高，提示兩指標(biāo)可能作為新的腫瘤標(biāo)記物，在宮頸疾病的診斷、分級(jí)及轉(zhuǎn)歸預(yù)判時(shí)有臨床實(shí)用意義。
　　二、在CIN及宮頸鱗癌中，hTERC基因擴(kuò)增與TERT蛋白表達(dá)一致，HPV、hTERC基因及TERT蛋白