人胰島移植純化技術的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  糖尿病已經成為人類健康的嚴重威脅。胰島移植在2000年Edmonton方案發(fā)布以后,已逐漸成為一項成熟的技術,成為治療1型糖尿病和逆轉糖尿病慢性并發(fā)癥的有效方法。本實驗旨在建立合適的人胰島移植純化方案,摸索純化液的配置方法,為開展臨床胰島移植奠定基礎。
  方法:
  獲取成人尸體胰腺,修剪后將胰腺剪成兩段,從胰管內插管灌注消化液。待胰腺膨脹后剪成小塊,在Ricordi腔室系統(tǒng)內循環(huán)消化,收集的組織經孵育后

2、使用連續(xù)密度梯度法,分別用COBE2991細胞分離機和改良后的大瓶離心法純化。對純化后的胰島經雙硫腙(DTZ)染色后計算胰島當量(IEQ)、純度及胰島回收率。
  結果:
  共實施九次胰島分離純化,前八次只使用COBE2991機進行分離純化,純化結果不理想算作失敗。第九次嘗試使用改良后的大瓶離心法,其中一半胰腺消化產物使用COBE2991純化,另一半采用改良后的大瓶離心法純化。結果胰腺組織重78.8g,純化前胰島當量為94

3、6000 IEQ。使用COBE機純化后的胰島當量為254600 IEQ,純度64%;而使用改良后的大瓶離心法純化后的724300 IEQ,純度90%;使用COBE機純化的每克胰腺胰島產量為3231 IEQ/g,而改良后大瓶離心法純化后的9192 IEQ/g。使用COBE機純化的胰島回收率為26.9%,而使用改良后大瓶離心法的胰島回收率為76.5%。
  結論:
  已掌握使用COBE2991純化胰島的技術。使用改良后的大瓶離

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