1、目的：研究器官聯(lián)合切取中的不同胰腺獲取方法是否對于胰島細胞的活性有影響。探討腦死亡自愿捐贈器官的供者多器官聯(lián)合切取時用于人類胰島細胞移植的胰腺獲取方法中，采用高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液經(jīng)原位灌注后胰島細胞的活性和冷缺血時間的關系。研究人類胰島細胞移植中供受者的HLA配型和胰島細胞存活的關系。以豬的胰島移植探討胰島細胞移植后穿刺出血及肝內感染的發(fā)生。 方法：采用高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液經(jīng)過供者腹主動脈進行原位灌注后，進行肝臟、胰腺、腎臟聯(lián)合

2、切取及各器官的單獨切取，在相同的冷缺血時間內，采用膠原酶P消化胰腺，分離并純化胰島細胞，進行胰島細胞活性染色，然后對比不同的切取方法是否對于胰島細胞的活性率有影響。高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液1,500-2,000ml經(jīng)主動脈原位灌注后，進行腎-胰腺-十二腸-脾聯(lián)合切取，切取后分離腎與胰腺-十二腸-脾，采用膠原酶P消化胰腺，分離并純化胰島細胞，進行胰島細胞活性染色。并將胰島細胞培養(yǎng)進行胰島素釋放試驗。將胰島細胞進行固定，切片后進行透射電鏡觀察胰

3、島細胞超微結構。將已知HLA配型的胰島細胞分別加入到HLA匹配組和錯配組的血液當中去，觀察混合培養(yǎng)1h后的血液當中血小板、中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞變化以及培養(yǎng)1h和24h后觀察活性胰島細胞的數(shù)量變化。采用高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液經(jīng)過豬的腹主動脈進行原位灌注后，進行胰腺切取，采用膠原酶P消化胰腺，分離并純化胰島細胞，然后對豬胃左靜脈穿刺后進行肝內胰島細胞移植，對受者豬進行飼養(yǎng)一周后，進行肝臟的病理學檢查。 結果：肝臟、胰腺、腎臟

4、聯(lián)合切取及各器官的單獨切取順利，無污染，在冷缺血時間5h以內胰島細胞活性率都在80％，經(jīng)原位灌注后各獲取方法之間對于胰島細胞活性無明影響。胰腺與腎臟經(jīng)高滲枸櫞酸鹽嘌呤溶液原位灌注滿意，胰島細胞的活性與冷缺血時間呈負相關，冷保存指數(shù)和胰島細胞活性呈正相關。胰島素釋放試驗胰島細胞功能良好，電鏡觀察胰島細胞結構良好。肝臟、胰腺、腎臟聯(lián)合切取及各器官的單獨切取順利，人類胰島暴露于未經(jīng)抗凝的人類血中，胰島將誘發(fā)一個迅速血細胞消耗。進行血小板激、中

5、性粒細胞和單核細胞計數(shù)，HLA錯配組(1.0±0.72×109/L，0.54±0.24×109/L，0.01±0.00×109/L)，HLA匹配組(6.0±0.27×109/L，0.63±0.19×109/L，0.03±0.01×109/L)，無論HLA錯配還是匹配與對照組相比較血細胞都發(fā)生明顯的消耗；加入肝素后血細胞計數(shù)HLA錯配組(57.2±21.10×109/L，1.74±0.87×109/L，0.75±0.24×109/L)，H

6、LA匹配組(67.9±19.0×109/L，3.42±0.61×109/L，0.47±0.08×109/L)與對照組比較P＜0.05，反應明顯減輕；進行胰島細胞體外培養(yǎng)24h活性胰島細胞數(shù)量分別為：匹配組(1.085±0.167×105/L)，錯配組(0.697±0.193×105/L)。P＜0.05，具有顯著性差異，良好組織相容性有利于胰島細胞存活。豬的胰島細胞移植共進行12例，穿刺部位出血占50％，肝感染占33.3％。 結論