1、背景:誘導(dǎo)多能性干細胞(inducedPluripotentStemcells，iPScells)是一種將外源性因子轉(zhuǎn)入成體細胞使其發(fā)生重編程后得到的具有干細胞特性的多能性干細胞。iPS細胞具有類似胚胎干細胞的相關(guān)特性，具有自我更新能力和多能性，有研究表明人的胚胎干細胞可以分化為胰島β細胞并表達相關(guān)特異標(biāo)記，成功治愈糖尿病小鼠模型。
　　目的：探討在相關(guān)生長因子的作用下人誘導(dǎo)多能性干細胞分化為胰島β細胞的可能性及研究該過程中干性因

2、子Oct4和胰島β細胞相關(guān)因子Pdx1、MafA與insulin的表達變化。
　　方法:1.采用相關(guān)生長因子分四個階段誘導(dǎo)iPS細胞向胰島素分泌細胞定向分化，使用實時定量PCR檢測分化過程中相關(guān)基因的表達變化;2.通過WesternBlot檢測分化成功后細胞與誘導(dǎo)多能性干細胞的干性基因Oct4和胰島β細胞相關(guān)基因在蛋白層面表達的差異;3.通過細胞免疫熒光技術(shù)檢測分化結(jié)束后成熟細胞內(nèi)相關(guān)蛋白的表達;4.檢測分化結(jié)束后成熟細胞分泌C肽

3、分泌驗證目的細胞的分化成功，并且使用流式細胞術(shù)檢測分化效率。
　　結(jié)果:1.干性因子Oct4的表達降低主要發(fā)生在前兩個階段，第三階段和第四階段表達無差異性;2.在分化過程中，胰島β細胞相關(guān)因子Pdx1在第一階段就可檢測到，后期表達增強;MafA表達在第一階段末期可檢測到低表達，但表達增強開始于第三、四階段;insulin在分化的第二階段末期被檢測到，表達明顯增強在第三和第四階段。3.WesternBlot結(jié)果顯示，與未分化前的誘導(dǎo)

4、多能性干細胞相比較，分化成熟后的細胞低表達Oct4蛋白，開始高表達Pdx1、MafA和insulin蛋白。4.細胞免疫熒光實驗證明分化結(jié)束后的細胞中有部分細胞成功表達胰島素分泌相關(guān)基因;5.分化結(jié)束C肽分泌實驗顯示在不同葡萄糖濃度的刺激下，目的細胞檢測到C肽分泌，并且存在統(tǒng)計學(xué)差異(t=2.878，P＜0.05)，證明胰島素分泌細胞的生成，流式細胞術(shù)證明分化的效率是5.40％。
　　結(jié)論:體外使用相關(guān)因子誘導(dǎo)iPS細胞可使其定向分