1、目的：糖尿病(Diabetes mellitus，DM)已成為發(fā)達國家中繼心血管病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病，對社會和經(jīng)濟帶來沉重負擔，是嚴重威脅人類健康的世界公共衛(wèi)生問題。干細胞可定向分化為胰島素分泌細胞(Insulin-producing cells，IPCs)的研究為糖尿病的治療提供了新的思路。骨髓干細胞(Bone marrow stem cells，BMSCs)可能是干細胞中的一類有希望的候選細胞，該類細胞具有多向分化潛能和

2、明顯的可塑性。許多體外研究已經(jīng)將骨髓干細胞成功誘導(dǎo)為胰島素分泌細胞，并將其移植到糖尿病大鼠體內(nèi)可以逆轉(zhuǎn)高血糖，但是離體干細胞移植存在易污染、易變異等問題。因此，本研究探討胃泌素(Gastrin)聯(lián)合表皮生長因子(Epidermal growth factor，EGF)是否能將骨髓干細胞體內(nèi)誘導(dǎo)為胰島素分泌細胞，并研究分化后的細胞對大鼠糖尿病是否有治療效果。 材料與方法： 1、藥物與試劑鏈脲佐菌素(Streptozotoc

3、in，STZ)，重組人粒細胞集落刺激因子(recombination human Granulocyte-colony stimulating factor，rhG-CSF，商品名特爾津)，表皮生長因子(Epidermal growth factor，EGF)、胃泌素(Gastrin)，小鼠抗大鼠胰島素單克隆抗體,即用型SABC試劑盒和DAB顯色劑，大鼠血清胰島素試劑盒。 2、動物分組與處理將40只wistar大鼠隨機分為正常組

4、、糖尿病組、動員組和動員并誘導(dǎo)組4組，每組10只。后三組大鼠一次性腹腔注射2％STZ(55mg/kg)建立糖尿病模型，動員組皮下注射rhG-CSF(商品名特爾津，10mg/kg.d)，連續(xù)5天，動員并誘導(dǎo)組皮下注射rhG-CSF(商品名特爾津，10mg/kg.d)，連續(xù)5天，在注射動員劑第2天開始同時腹腔注射3ug/mLGastrin(3ug/kg.d)和3ug/mLEGF(1ug/kg.d)，連續(xù)14天，正常組和糖尿病組同時腹腔注射相

5、當劑量的生理鹽水。 3、檢測指標及方法實驗過程中每周測體重，每2周測一次血糖，給藥前和實驗終止時各取血測空腹胰島素一次(ELISA法)，至10周實驗終止時10％水和氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，取肝臟、脾臟、胰腺用免疫組織化學(xué)(SABC法)檢測其中胰島素染色陽性細胞的表達。經(jīng)圖像采集分析系統(tǒng)對各組胰腺中胰島素染色陽性細胞區(qū)域占胰島區(qū)域百分比進行分析。 結(jié)果： 1、生化檢測結(jié)果給藥前糖尿病組、動員組、動員并誘導(dǎo)

6、組血糖、胰島素無明顯差異。給藥結(jié)束后動員組和動員并誘導(dǎo)組血糖均高于正常組，但較糖尿病組均下降(P<0.05)，實驗終止時動員并誘導(dǎo)組血糖明顯低于糖尿病組(P<0.01)，但仍高于正常組；胰島素明顯高于糖尿病組(P<0.01)，與正常組無顯著性差異。動員組血糖和胰島素與糖尿病組無明顯差異(P>0.05)。整個病程中正常組體重始終高于其它各組(P<0.05)。 2、免疫組織化學(xué)及圖像分析結(jié)果實驗終止時免疫組織化學(xué)檢測胰腺中胰島素陽性

7、細胞百分比發(fā)現(xiàn)正常組明顯高于其他各組(P<0.01)，動員并誘導(dǎo)組低于正常組但是明顯高于糖尿病組(P<0.05)和動員組(P<0.05)，而動員組與糖尿病組無顯著性差異(P>0.05)。在動員并誘導(dǎo)組的肝臟中發(fā)現(xiàn)胰島素染色陽性細胞表達，但脾臟中沒有發(fā)現(xiàn)表達。其他各組肝臟脾臟中均沒有胰島素染色陽性細胞表達。 結(jié)論： 1、胃泌素聯(lián)合表皮生長因子可以將骨髓干細胞體內(nèi)誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細胞。 2、由骨髓干細胞分化而來的