1、背景:
　　高危型人乳頭瘤病毒（high risk-human papillomaviruses，HR-HPVs）與宮頸癌存在病因學關系，其早期基因E6的持續(xù)表達是其致癌的重要因素。鋅指蛋白(zinc fingerprotein，ZNF)家族與多種腫瘤的發(fā)生與演進密切相關，ZNF84是ZNF家族重要成員之一。本課題組經(jīng)Agilent人基因表達譜芯片分析，發(fā)現(xiàn)沉默E6表達后，ZNF84基因表達下調。HPV16 E6與ZNF84的關系

2、尚不清楚。
　　目的:
　　以HPV16 E6表達陽性的宮頸鱗癌組織、宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelialneoplasia，CIN)組織、富頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株（宮頸癌SiHa細胞）以及HPV16 E6表達陰性的宮頸鱗癌組織、CIN組織、宮頸鱗狀上皮組織、宮頸癌細胞株（宮頸癌C33-A細胞）為研究對象，研究ZNF84在HPV16相關宮頸癌發(fā)生與演進中的表達及作用，為進一步研究HPV16相

3、關宮頸癌防治措施提供科學依據(jù)。
　　方法:
　　1.通過Western blotting方法檢測ZNF84在宮頸癌SiHa細胞（HPV16 E6表達陽性）和宮頸癌C33-A細胞(HPV16 E6表達陰性)中的表達。
　　2.通過免疫組織化學(immunohistochemistry，IHC)染色方法檢測ZNF84在HPV16 E6表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織和HPV16 E6表達陰性的宮頸鱗狀上

4、皮組織、CIN組織、宮頸鱗癌組織中的表達，并分析二者之間表達的關系。
　　3.設計以ZNF84 mRNA為靶點的短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）序列，構建pGenesil-1-shRNA-ZNF84重組質粒和含無關序列的pGenesil-1-shRNA-vect對照質粒。
　　4.經(jīng)脂質體介導將上述質粒分別轉入HVP16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞，其中轉染pGenesil-1-shRNA

5、-ZNF84重組質粒的SiHa細胞命名為SiHa-shRNA-ZNF84細胞，轉染pGenesil-1-shRNA-vect對照質粒的SiHa細胞命名為SiHa-shRNA-vect細胞。篩選鑒定后，通過Transwell遷移和侵襲實驗等觀察HPV16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞在ZNF84表達沉默后遷移和侵襲能力的變化。
　　結果:
　　1.Western blotting結果顯示:HPV16 E6在宮頸癌C33-A

6、細胞中不表達，而HPV16 E6在宮頸癌SiHa細胞中呈陽性表達。ZNF84在HPV16 E6表達陰性的C33-A細胞和HPV16 E6表達陽性的SiHa細胞中均呈陽性表達，但C33-A細胞中ZNF84的表達顯著低于SiHa細胞(P＜0.01)。
　　2.IHC結果顯示:ZNF84在HPV16 E6表達陽性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和宮頸鱗癌組織中的表達均分別顯著高于其在HPV16 E6表達陰性的宮頸鱗狀上皮組織、CIN組織和

7、宮頸鱗癌組織中的表達，二者表達呈正相關(P＜0.01)。
　　3.以ZNF84 mRNA為靶點的shRNA對宮頸癌SiHa細胞中ZNF84表達的沉默效應。Western blotting方法檢測各組細胞中ZNF84表達（以β-actin為內參照）的結果顯示:ZNF84在SiHa-shRNA-ZNF84細胞中的表達顯著低于其在SiHa細胞和SiHa-shRNA-vect細胞中的表達(P＜0.01)，沉默效率為:95.630％。與Si

8、Ha細胞相比，ZNF84在SiHa-shRNA-vect細胞中的表達無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.ZNF84表達沉默對HPV16 E6表達陽性的宮頸癌SiHa細胞遷移和侵襲能力的影響，Transwell遷移和侵襲實驗的結果均顯示:SiHa-shRNA-ZNF84細胞穿過小室底膜的細胞數(shù)顯著少SiHa-shRNA-vect細胞(P＜0.01)。
　　結論:
　　1.證明了E6和ZNF84在HPV16 E6表達陽性