1、慢性乙型肝炎由HBV病毒引起的一種傳染性很強的疾病，在全世界范圍內廣泛流行，并可引起急慢性肝炎、肝硬化、肝代謝失常、肝癌等，嚴重威脅著人類的生命健康。雖然乙肝疫苗能有效抑制乙型肝炎的感染，但其對已感染的人群無效及抗體滴度逐年下降等缺陷，全球仍有數以億計的HBV病毒感染患者[1-3]。目前臨床上防治乙肝的藥物主要是核苷類和干擾素，核苷類藥物主要通過抑制病毒DNA聚合酶和反轉錄酶的活性，對病毒 DNA的復制具有很強的抑制作用，但是由于長時間

2、使用，病毒 DNA發(fā)生變異而耐藥，導致原有的藥物作用降低、失效甚至副作用增加，而且停藥易反彈，難以徹底清除病毒。干擾素主要增強機體的免疫力而具有抗 HBV的作用，但是干擾素存在耐受性差，適應范圍窄，給藥不便，不良反應多，遠期治療效果不理想等原因，使其臨床使用受到限制。因此，開發(fā)研究新的抗乙肝藥物迫在眉睫。
　　FNC(2’-脫氧-2’-氟-4’-疊氮-核苷類似物)是一種新型核苷類化合物，由鄭州大學化學與分子工程學院合成。研究表明，

3、FNC毒性較低且具有良好的抗HBV、HCV及抗腫瘤活性；FNC對HBV野生型HepG2.215細胞模型、3TC耐藥的HepG2.211細胞模型及鴨乙肝模型都具有良好的抗HBV活性。為了進一步探究FNC的抗HBV作用，我們對野生型HepG2.CW細胞株、同時耐3TC和ETV的HepG2.LER細胞株及HBV轉基因小鼠進行了實驗。
　　本課題分兩部分，第一部分為體外實驗，通過野生型HepG2.CW細胞和雙重耐藥型 HepG2.LER細

4、胞，采用CCK-8法檢測 FNC的毒性，運用ELISA和FQ-PCR法分別檢測給藥3、6、9天HBsAg、HBeAg分泌及細胞內外HBV DNA復制的影響，來探究 FNC體外抗乙肝活性；第二部分為體內實驗，對轉染了人類HBV的轉基因小鼠進行實驗，通過對小鼠血清HBsAg、HBeAg的分泌、血清HBV DNA、肝臟核心顆粒的檢測指標及病理切片，來探究FNC對體內抗乙肝的作用。
　　第一部分：FNC體外抗HBV活性研究。[目的]探究F

5、NC對野生型HepG2.CW細胞及雙重耐藥的HepG2.LER細胞的抗乙肝活性。[方法]采用CCK-8法檢測FNC對HepG2.CW細胞和HepG2.LER細胞的毒性，再于第3、6、9天收集細胞及上清，用ELISA法檢測FNC對HepG2.CW細胞和HepG2.LER細胞上清抗原分泌的影響，同時用FQ-PCR法檢測FNC對上清及細胞內HBV DNA復制的作用，分別以ETV、ADV做陽性對照。[結果]（1）FNC對HepG2.CW細胞的作

6、用。9天時，0.1μM FNC對 HepG2.CW細胞 HBsAg、HBeAg分泌的抑制率分別69.62％、73.32%，同濃度下陽性藥ETV為22.52%、2.26%；FNC對HepG2.CW細胞上清及細胞內 HBV DNA的抑制率為98.73%、99.56%，陽性藥 ETV為99.51%、90.26%。另外，對3、6、9天樣品的檢測，發(fā)現FNC具有明顯的時間和劑量依賴性；（2）FNC對 HepG2.LER細胞的作用。與（1）作用相似

7、，FNC對HepG2.LER細胞HBsAg、HBeAg分泌及細胞內外HBV DNA都有很強的抑制作用，且比陽性對照藥ADV具有更強的優(yōu)勢；FNC對HepG2.LER細胞具有時間劑量依賴性。[結論] FNC不僅對野生行HepG2.CW細胞具有很強的抗HBV作用，而且對雙重耐藥HepG2.LER細胞具有很強的抗HBV活性,且抑制作用比市場流通的陽性藥ETV、ADV效果差不多或更強，具有廣闊的開發(fā)前景。
　　第二部分：FNC體內抗HBV

8、活性研究。[目的]探究FNC對HBV轉基因小鼠的作用。[方法]將符合標準的轉基因小鼠分組，口腔灌服不同劑量的FNC溶液，持續(xù)給藥14天，以ETV為藥性對照。用ELISA、FQ-PCR法檢測小鼠血清HBsAg、HBeAg抗原分泌、血清HBV DNA及肝臟核心顆粒復制情況，并對小鼠肝臟進行病理切片觀察，綜合評價FNC抗HBV及保肝作用。[結果] FNC對轉基因小鼠的作用具有明顯的雌雄差異，對雌鼠和雄鼠HBsAg抑制率最高分別為34.78%、

9、60.79%，雄鼠HBeAg為34.70%，雌鼠對HBeAg無效；FNC對雌鼠和雄鼠血清HBV DNA最高抑制率為52.27%、68.49%，高于陽性對照ETV的10.82%、58.84%；對雌鼠和雄鼠肝臟核心顆粒的最高抑制率分別為97.32%、95.23%，與陽性對照藥ETV（96.92%、98.59%）相差不大；病理切片觀察，FNC具有明顯的保肝作用，而 ETV對肝臟有一定的毒性，脂肪空泡較多。[結論] FNC對轉基因小鼠具有很強的