1、5型重組腺病毒載體(rAdv)因具有基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、病毒載體滴度高及能感染非復(fù)制相細(xì)胞等多種優(yōu)點(diǎn)而得到廣泛應(yīng)用，目前我國(guó)已經(jīng)有兩種基于腺病毒的抗腫瘤藥物得到批準(zhǔn)。但由于rAdv的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)主要是通過(guò)柯薩奇病毒．腺病毒受體(CAR)介導(dǎo)，導(dǎo)致rAdv對(duì)CAR受體表達(dá)缺失的細(xì)胞基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低下。因此研究非CAR受體依賴的、高效、低毒及簡(jiǎn)單易行的促進(jìn)rAdv基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的方法十分必要。
　　 殼聚糖是一種天然的陽(yáng)離子多糖，具有無(wú)毒、生物

2、相容性好、生物可降解及無(wú)免疫原性等多種優(yōu)點(diǎn)。但是其在生理pH條件下(pH7.4)不溶的特性限制了其生物學(xué)應(yīng)用。已有的殼聚糖促進(jìn)rAdv基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的實(shí)驗(yàn)需要特殊的酸性pH條件(pH6.4)，限制了其應(yīng)用，需要開發(fā)新的方法。鑒此，本研究擬探索在生理pH條件下促進(jìn)rAdv的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率新的殼聚糖溶解方法，闡明其促進(jìn)基因轉(zhuǎn)導(dǎo)能力，并在小鼠體內(nèi)測(cè)試其促進(jìn)口服rAdv免疫效果，為殼聚糖用于促進(jìn)rAdv介導(dǎo)的基因治療和疫苗免疫效果提供基礎(chǔ)。

3、　　 本研究首先建立了促進(jìn)殼聚糖在pH7.4條件下溶解的方法。經(jīng)過(guò)大量篩選，我們發(fā)現(xiàn)利用NaHCO3溶液可以實(shí)現(xiàn)殼聚糖在生理pH條件下的溶解。結(jié)果顯示，該殼聚糖溶液具有明顯的生物學(xué)效應(yīng)，可以在生理pH條件下顯著促進(jìn)rAdv在多種細(xì)胞上的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在CAR受體缺陷的細(xì)胞（CHO、DC2.4、RD、B16細(xì)胞系）中，殼聚糖碳酸氫鈉溶液可以將rAdv的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高8～20倍；而在CAR受體高表達(dá)的細(xì)胞系(A549和HepⅡ)，殼聚糖

4、碳酸氫鈉溶液也可以將rAdv的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提高1.5倍左右。殼聚糖碳酸氫鈉溶液的促進(jìn)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用不受培養(yǎng)基中血清及rAdv純度的影響，對(duì)抗Ad5血清也有一定的耐受性。說(shuō)明殼聚糖碳酸氫鈉溶液可以非CAR受體依賴、高效、低毒及簡(jiǎn)便易行的促進(jìn)rAdv基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
　　 在觀察了殼聚糖碳酸氫鈉溶液在體外促進(jìn)rAdv基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率之后，我們觀察該新溶液是否具有在體應(yīng)用的價(jià)值。我們發(fā)現(xiàn)在殼聚糖碳酸氫鈉溶液基礎(chǔ)上研制的殼聚糖制劑可以顯著提高rAd

5、v對(duì)模擬胃液環(huán)境的耐受性，且該作用可以被海藻糖進(jìn)一步加強(qiáng)。相對(duì)于口服單獨(dú)給予表達(dá)輪狀病毒VP6基因的重組腺病毒(rAdv-VP6)疫苗，口服給予小鼠rAdv-VP6疫苗的殼聚糖制劑可以顯著提高免疫后小鼠血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率以及抗體滴度，并可誘導(dǎo)粘膜器官抗原特異性IgA反應(yīng)。輪狀病毒攻擊保護(hù)試驗(yàn)證實(shí)其能顯著降低輪狀病毒攻擊后小鼠糞便中的排毒量。結(jié)果表明，該殼聚糖制劑可以顯著提高口服rAdv-VP6的免疫效果及攻毒保護(hù)效果。
　　 綜上所