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![鹽霉素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)分泌影響的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/831d40eb-0b33-40b6-aaa0-021ee5be2ae7/831d40eb-0b33-40b6-aaa0-021ee5be2ae71.gif)
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1、目的:研究鹽霉素在體外對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)增殖及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)分泌的影響,并探討其作用的發(fā)揮是否通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)。
方法:以HSC-T6為研究對(duì)象,分別用不同濃度的鹽霉素及其溶媒DMSO處理HSC-T6不同時(shí)間后,用CCK-8法檢測(cè)鹽霉素對(duì)HSC-T6細(xì)胞增殖的影響,并得出最適濃度及時(shí)間,以調(diào)整后續(xù)實(shí)驗(yàn)的藥物濃度。用光學(xué)倒置顯微鏡觀察正常組、溶媒DMSO組及鹽霉素處理組的細(xì)胞形
2、態(tài)變化。應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)肝纖維化指標(biāo)Ⅲ型前膠原(PCⅢ)及透明質(zhì)酸(HA)的表達(dá)情況。用流式細(xì)胞儀(PI單染法)測(cè)細(xì)胞周期。分別采用RT-PCR和Western Blot檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)分子β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果:鹽霉素體外抑制HSC-T6增殖,在一定范圍內(nèi)呈劑量、時(shí)間依賴關(guān)系,24小時(shí)的IC50為27.7μmol/L,以此調(diào)整
3、接下來的處理組濃度分別為15μmol/L、30μmol/L及60μmol/L。光學(xué)倒置顯微鏡下可見處理組細(xì)胞縮小,胞核固縮,部分細(xì)胞碎裂成片,且隨著鹽霉素濃度增加,形態(tài)改變更加明顯。化學(xué)發(fā)光免疫結(jié)果提示鹽霉素能降低PCⅢ、HA蛋白的表達(dá)水平,鹽霉素濃度越大,PCⅢ、HA水平越低。鹽霉素能阻滯HSC-T6于G1期:隨藥物濃度的加大,G1期細(xì)胞比例增大,而S期細(xì)胞比例減少。鹽霉素能下調(diào)β-catenin、cyclin D1、c-Myc mR
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