1、目的:已有研究表明表遺傳學(xué)與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中DNA的啟動(dòng)子區(qū)高甲基化沉默抑癌基因中起至關(guān)重要的作用。本文著重研究EYA4基因在胃癌中的表達(dá)水平與DNA啟動(dòng)子區(qū)的甲基化的關(guān)系，及其在臨床工作的意義。
　　研究方法:實(shí)驗(yàn)材料:取1株人體胃黏膜上皮永生化細(xì)胞株GES-1，4株胃癌細(xì)胞株（SGC-7901、MKN-45、MGC-803、BGC-823），胃癌組織及其對(duì)應(yīng)的癌旁非癌組織標(biāo)本81例。實(shí)驗(yàn)方法:1、實(shí)時(shí)定量qRT-P

2、CR檢測(cè)EYA4基因mRNA在細(xì)胞及組織層面中的表達(dá)水平。2、Western Blot檢測(cè)在胃癌細(xì)胞株中EYA4蛋白表達(dá)的量，且檢測(cè)MKN-45細(xì)胞株采用去甲基化藥物后蛋白表達(dá)的水平。3、采用甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)細(xì)胞和組織層面EYA4基因啟動(dòng)子甲基化情況。4、藥物干預(yù)試驗(yàn):選取MKN-45細(xì)胞株行去甲基化藥物干預(yù)，并且檢測(cè)藥物干預(yù)后EYA4基因的表達(dá)水平。5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用卡方檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)，對(duì)胃癌及其相對(duì)應(yīng)的癌旁非癌組織，

3、EYA4基因mRNA表達(dá)水平和DNA甲基化情況和病理指標(biāo)來分析。
　　結(jié)果:1、EYA4基因在MKN-45、MGC-803、BGC-823、SGC-7901胃癌細(xì)胞株中mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯低于GES-1細(xì)胞的表達(dá)。EYA4的mRNA在胃癌組織中低表達(dá)與組織學(xué)分化(P＜0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.05)、浸潤(rùn)深度(P＜0.05)及TNM分期(P＜0.05)有顯著相關(guān)。2、EYA4 DNA啟動(dòng)子區(qū)在GES-1中呈現(xiàn)非甲基化狀

4、態(tài)，在MGC-803中呈現(xiàn)部分的甲基化狀態(tài)，在SGC-7901、BGC-823、MKN-45中呈高甲基化狀態(tài)。3、對(duì)MKN-45采用藥物5-Aza-dC干預(yù)后，能夠檢測(cè)出EYA4 mRNA和蛋白的表達(dá)都呈現(xiàn)上調(diào)。4、胃癌樣本及其對(duì)應(yīng)的癌旁非癌樣本中EYA4的啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化呈現(xiàn)出差異，胃癌樣本EYA4的DNA甲基化頻率高于與之匹配的癌旁非癌樣本（60.5％ vs9.9％，P＜5％）。胃癌組織中EYA4的DNA異常高甲基化與Borrm

5、ann分型(P＜0.05)、組織分化(P＜0.05)、浸潤(rùn)深度（P＜0.05）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.05)呈現(xiàn)密切相關(guān)性，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:1、EYA4基因在4株胃癌細(xì)胞株中及胃癌組織中表達(dá)呈現(xiàn)下調(diào)狀態(tài)，且與胃癌的分化類型、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期關(guān)系緊密。2、EYA4基因啟動(dòng)子的高甲基化導(dǎo)致該基因的表達(dá)下調(diào)，并且采用去甲基化藥物5-Aza-dC的干預(yù)，使EYA4基因的表達(dá)上調(diào)。3、EYA4基因高甲基化與胃