1、目的：探究雄激素對內(nèi)皮祖細胞（EPC）的體外血管形成能力、遷移能力的影響，及對體內(nèi)EPC血管新生功能影響。并初步探討了參與這一過程的相關(guān)機制。
　　方法：密度梯度離心法提取小鼠骨髓單個核細胞，EBM-2培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化為EPC。DiI染色及流式細胞術(shù)鑒定分化后 EPC。培養(yǎng)第2天，以含不同濃度雙氫睪酮（DHT）的條件培養(yǎng)基干預(yù)EPC。于第4、5、7、9、11天分別抽取EPC全RNA行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測細胞中血管內(nèi)

2、皮生長因子（VEGF）表達量。培養(yǎng)第7天，行體外管樣結(jié)構(gòu)結(jié)合實驗及Transwell小室遷移實驗。制作小鼠下肢缺血模型，以DHT或未處理的EPC局部肌肉注射治療小鼠下肢缺血，激光多普勒檢查評價小鼠缺血后肢血流灌注恢復(fù)情況，免疫熒光觀察缺血部位毛細血管新生密度及GFP標(biāo)記EPC存活量。設(shè)計早期生長反應(yīng)因子1（Egr1）siRNA干擾片段。進行體外管樣結(jié)構(gòu)結(jié)合實驗及Transwell小室遷移實驗，比較DHT處理組及DHT+Egr1 siRN

3、A轉(zhuǎn)染組EPC的血管形成及遷移能力，評估Egr1是否參與DHT對EPC血管生成能力及遷移能力的調(diào)控。
　　結(jié)果：DiI染色及流式細胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示誘導(dǎo)分化的細胞特征符合EPC特點。RT-PCR結(jié)果顯示DHT以劑量依賴性及時間依賴性的方式顯著增強EPC中VEGF表達量，這一增強作用于培養(yǎng)第7天、10nmol/L濃度達到高峰（P<0.05）。體外管樣結(jié)構(gòu)結(jié)合實驗及 Transwell小室遷移實驗結(jié)果顯示 DHT以劑量依賴性的方式顯著增

4、強 EPC的血管形成能力及遷移能力（P<0.05），且這一增強作用于10nmol/L濃度達到最強。小鼠下肢缺血模型制作成功，激光多普勒檢測顯示DHT處理的EPC治療的小鼠下肢血流灌注恢復(fù)明顯較未處理 EPC組及對照組為高（P<0.05），免疫熒光結(jié)果顯示注射DHT處理的EPC組缺血部位毛細血管新生密度顯著高于未處理EPC組及對照組，EPC存活率高于未處理EPC組（P<0.05）。Egr1 siRNA設(shè)計成功，EPC轉(zhuǎn)染Egr1 siRN

5、A效率高于90%，轉(zhuǎn)染后Egr1基因表達抑制率達60%（P<0.05）。體外管樣結(jié)構(gòu)結(jié)合實驗及transwell小室遷移實驗顯示，10nmol/L DHT+Egr1-siRNA轉(zhuǎn)染組EPC的血管形成能力及遷移能力較單純10nmol/L DHT處理組均明顯下降（P<0.05）。
　　結(jié)論：體外實驗顯示DHT以劑量依賴性的方式顯著增強EPC的血管形成能力及遷移能力，這一增強作用于10nmol/L濃度達到最強。體內(nèi)實驗顯示 DHT增強E