1、炎癥性腸病(IBD)，尤其是潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的在中國的發(fā)病率越來越高，直接影響人們的正常生活并增加了患癌癥的幾率，但它的發(fā)病機制尚不明確。目前研究發(fā)現(xiàn)UC的發(fā)病機制與腸道菌群失調(diào)、腸道粘膜功能障礙、腸道內(nèi)分化的免疫調(diào)節(jié)功能障礙等有關(guān)，尤其是腸道免疫失調(diào)和信號通路的改變引起了特別關(guān)注。對IBD的治療手段也在不斷的更新，其中TNF-α抑制劑的使用，引起了我們的關(guān)注。另外，因為骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)具有高分化能力、低免疫原性、調(diào)節(jié)免

2、疫系統(tǒng)、歸巢機體損傷部位和腫瘤等方面的優(yōu)勢而已經(jīng)使用于臨床治療。也已有文獻提示MSCs能夠通過調(diào)節(jié)腸炎小鼠的免疫系統(tǒng)而對小鼠腸炎進行損傷修復(fù)，但MSCs具體的作用機制并不明確。因此，本論文我們重點關(guān)注機體內(nèi)的炎癥因子對MSCs影響及其MSCs對腸炎的治療作用和機制研究。
　　我們選取TNF-α和IFN-γ作為研究中的目的炎癥因子，將體內(nèi)的微環(huán)境擴大化，研究炎癥因子對MSCs的影響以及其作用機制。首先我們構(gòu)建了shIKKα/MSCs

3、細胞株，用3％DSS給小鼠正常飲水7天，構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型，發(fā)現(xiàn)MSCs在結(jié)腸損傷部位聚集歸巢。然后我們用2％的DSS給小鼠正常飲水11天構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型，從第3天起隔天給小鼠尾靜脈注射WT/MSCs、經(jīng)TNF-α、IFN-γ預(yù)處理6h、24h、72h的MSCs、shIKKα/MSCs和經(jīng)NF-κB信號通路抑制劑CHS-828處理24h后的MSCs。我們發(fā)現(xiàn)WT/MSCs對腸炎小鼠有修復(fù)作用，能緩解腸炎小鼠的炎癥反應(yīng)，減緩小鼠體重變化

4、、結(jié)腸長度變化，降低腸炎小鼠中MPO水平;小鼠血清、血漿、結(jié)腸組織中促炎因子的（IL-17、IL-1β、TNF-α、IFN-γ）表達下降。但是尾靜脈注射經(jīng)過TNF-α、IFN-γ預(yù)處理6h、24h、72h的MSCs后，隨著干預(yù)時間的增加，腸炎小鼠的炎癥反應(yīng)加重，小鼠體重變化大、MPO水平上升、結(jié)腸組織損傷加重。小鼠血清、血漿、結(jié)腸組織中的促炎因子（IL-17、IL-1β、TNF-α、IFN-γ）表達升高。WesternBlotting、

5、免疫熒光、免疫組化檢測結(jié)腸組織中NF-κB信號通路、STAT3信號通路的激活情況，發(fā)現(xiàn)結(jié)腸組織細胞質(zhì)中IκBα表達下降、p-IκBα表達上升，STAT3表達下降，p65、p-STAT3入核增加。免疫組化檢測Ki-67、PCNA的表達量，我們發(fā)現(xiàn)尾靜脈注射經(jīng)過TNF-α、IFN-γ預(yù)處理6h、24h、72h的MSCs后，隨著干預(yù)時間的增加，實驗小鼠結(jié)腸組織Ki-67、PCNA表達增加，說明在長時間炎癥因子刺激MSCs下，MSCs加重腸炎小

6、鼠的炎癥反應(yīng)，持續(xù)激活小鼠結(jié)腸組織中NF-κB、STAT3信號通路，小鼠結(jié)腸組織出現(xiàn)異常增殖，腸炎小鼠發(fā)生病變甚至癌變。而在shIKKα/MSCs組、CHS-828組干預(yù)了MSCs的NF-κB的信號通路與WT/MSCs組相比，促炎因子(IL-17、IL-1β、TNF-α、IFN-γ)整體表達降低，在一定程度上影響了腸炎小鼠的炎癥反應(yīng)，說明了MSCs的NF-κB通路的激活在腸炎小鼠的炎癥反應(yīng)中是必要的。
　　有研究提示在炎癥初期，M

7、SCs在腸道損傷部位能夠促腸組織纖維化，α-SMA水平升高，加強機體的修復(fù)功能。但在本研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過TNF-α、IFN-γ預(yù)處理6h、24h、72h的MSCs，隨著時間的增加，MSCs的組織纖維修復(fù)能力下降;血漿中的TGF-β的mRNA水平下降，而CXCR4、MCP-1水平mRNA升高。同時TNF-α、IFN-γ預(yù)處理MSCs，隨著處理時間的增加，MSCs的歸巢遷移到損傷部位作用加強，這與血漿中的CXCR4、MCP-1mRNA水平升高

8、有關(guān)。而shIKKα/MSCs組、CHS-828組與WT/MSCs組相比，干預(yù)了MSCs的NF-κB的信號通路，MSCs的纖維化組織修復(fù)能力和遷移歸巢能力也會受到影響，α-SMA表達降低，細胞因子TGF-β、MCP-1、CXCR4mRNA水平降低。此外，在體外實驗中還發(fā)現(xiàn)MSCs與巨噬細胞共培養(yǎng)相互促進炎癥因子IL-1β、TNF-α的釋放。
　　根據(jù)上述實驗結(jié)果，我們推測腸炎小鼠體內(nèi)的炎癥因子如TNF-α、IFN-γ的共同作用促進

9、了MSCs到損傷部位的定向遷移，參與了結(jié)腸組織的損傷修復(fù)，其作用機制可能與MSCs自分泌或通過與其他組織細胞、免疫細胞的相互作用調(diào)控了各種炎癥因子、細胞因子的釋放，共同參與到早期炎癥組織的修復(fù)，但是長時間的接觸炎癥因子，MSCs促進結(jié)腸組織纖維化作用下降、NF-κB/STAT3信號通路的持續(xù)激活和促進炎癥因子的持續(xù)釋放，這些將會加重炎癥進程，促使結(jié)腸組織發(fā)生病變甚至癌變。干預(yù)影響了MSCs的NF-κB信號通路，MSCs的損傷修復(fù)功能下降