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1、隨著轉(zhuǎn)基因作物種植面積的擴(kuò)大和商業(yè)化程度的加深,轉(zhuǎn)基因作物的安全性也受到了人們的關(guān)注。2007年,全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積增長(zhǎng)率達(dá)12%,達(dá)到1.143億h㎡(2.824億英畝),種植轉(zhuǎn)基因作物的國(guó)家增加到了23個(gè)。但是存在于轉(zhuǎn)基因植物中的具有抗生素或除草劑抗性的標(biāo)記基因是否會(huì)對(duì)環(huán)境及人類健康有不良影響和損害引起了廣泛關(guān)注,因此轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的剔除成為亟待解決的問題。 本研究利用Cre/loxP系統(tǒng)和受化學(xué)誘導(dǎo)的GR系統(tǒng),將
2、GR LBD結(jié)構(gòu)域序列與Cre重組酶基因結(jié)合形成融合基因,之后與抗潮霉素標(biāo)記基因一起插入到兩個(gè)同向loxP位點(diǎn)內(nèi),構(gòu)建形成基于Cre/loxP系統(tǒng)誘導(dǎo)刪除抗生素基因的表達(dá)載體。為了穩(wěn)定整個(gè)載體的結(jié)構(gòu)、防止Cre重組酶基因在原核生物中表達(dá),將擬南芥隱花色素1(Cry1)的內(nèi)含子(Intron-346)插入到重組酶基因中。同時(shí)為了降低重組酶基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)植物的毒害作用,載體構(gòu)建過程中選用表達(dá)量較低的Pnos來調(diào)控重組酶基因。本研究已完成了基
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