1、目的：建立用雙平臺法（流式細(xì)胞儀和血細(xì)胞計數(shù)儀）檢測人外周血淋巴細(xì)胞亞類絕對數(shù)及相對數(shù)的流式方法，分析更精細(xì)的淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量，并將此方法應(yīng)用于 Wiskott-Aldrich綜合征患兒，全面評估患兒免疫功能。
　　方法：取人EDTA抗凝外周血500μl，200μl用于血細(xì)胞計數(shù)儀測得淋巴細(xì)胞絕對數(shù)；300μl用于流式細(xì)胞分析，通過特異性單克隆抗體與細(xì)胞表面抗原作用，測得所需淋巴細(xì)胞亞群相對數(shù)。各淋巴細(xì)胞亞群相對數(shù)（百分率）×淋巴

2、細(xì)胞絕對數(shù)，即得到各淋巴細(xì)胞亞群絕對數(shù)。采用此方法檢測2014年6月至2015年3月于我院就醫(yī)的20例男性WAS患兒，年齡4月到4歲不等，這些WAS患兒均經(jīng)基因檢測及 WASp蛋白檢測確診。利用精細(xì)免疫分型方法，從傳統(tǒng)淋巴細(xì)胞分類、B細(xì)胞精細(xì)免疫分型和T細(xì)胞精細(xì)免疫分型分析WAS患兒淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量變化。
　　結(jié)果：成功建立精細(xì)免疫分型流式檢測方法，并通過全血標(biāo)本與PBMC標(biāo)本對比證實全血標(biāo)本檢測是可靠的。檢測WAS患兒所有細(xì)胞亞

3、群均經(jīng)過正態(tài)檢驗，正態(tài)分布的指標(biāo)采取配對 T檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；非正態(tài)分布的指標(biāo)采取Wilcoxon配對符號秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。WAS患兒Th細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和絕對數(shù)均低于正常同齡對照；NK細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和相對數(shù)明顯高于正常對照；而 B細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)和絕對數(shù)明顯低于正常兒童；WAS患兒CD8 na?ve亞群百分?jǐn)?shù)和絕對數(shù)均明顯少于正常對照；CD8 EM亞群百分?jǐn)?shù)和絕對數(shù)大于正常對照；WAS患兒CD8 TEMRA和CD8 CM亞群比例增高，與正

4、常對照相比有統(tǒng)計學(xué)差異。WAS患兒B細(xì)胞4個亞群（記憶、初始、過渡B細(xì)胞和漿母細(xì)胞）明顯低于正常對照，均有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論：（1）成功建立了使用微量抗凝外周血檢測精細(xì)淋巴細(xì)胞亞群的多色流式分析方法，利用本方法進(jìn)行的正常兒童免疫細(xì)胞精細(xì)分型參考范圍正在制定中。（2）本研究檢測了WAS患兒中20群淋巴細(xì)胞精細(xì)亞群的數(shù)量變化，發(fā)現(xiàn)WASp缺陷導(dǎo)致外周血B細(xì)胞及亞群數(shù)量明顯下降，外周血中 B細(xì)胞分布異常，免疫穩(wěn)態(tài)紊亂；在非感染狀態(tài)下