1、蚯蚓蛋白水解酶（earthworm protease，EP）是一類在蚯蚓體內(nèi)分離到的具有纖溶酶活性和激活纖溶酶原作用的蛋白水解酶。因具有抗凝、纖溶和溶栓作用，可以作為溶栓藥物治療因血栓引起的各種疾病，因此也習(xí)慣被稱為蚯蚓纖溶酶（earthworm fibrinolytic enzymes，EFE）。實(shí)驗(yàn)證明，不同實(shí)驗(yàn)室因取材或分離純化手段不同，獲得的組分也各不相同，但按照純化的天然EP組分的蛋白N-末端序列保守性和抗原特異性，可以將EP

2、大致分為四組，即P-0、P-Ⅰ、P-Ⅱ和P-Ⅲ。
　　 為了解該酶多組分的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，本研究利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫以及BLAST和DNAman軟件，對(duì)已報(bào)道的27條EFE基因和Lumbricidae的dbEST進(jìn)行分析，證明EFE基因具有多態(tài)性。與此同時(shí)，在已獲得各組基因的基礎(chǔ)上，對(duì)EFE克隆表達(dá)產(chǎn)物的活性差異進(jìn)行了分析，為其生物化學(xué)、藥理分析和生物工程方面的研究提供了參考資料。具體研究?jī)?nèi)容如下：
　　 1.根據(jù)純化的天然E

3、FE的N-末端序列信息，本研究在NCBI上進(jìn)行BLAST，分別建立了P-0、P-Ⅰ和P-Ⅱ三組的EST數(shù)據(jù)庫，利用DNAman進(jìn)行拼接得到了若干條新序列。同源性證明，P-0和P-Ⅰ兩個(gè)組的電子克隆產(chǎn)物與已報(bào)道的基因序列有差異，并分屬于P-0兩個(gè)亞組和P-Ⅰ四個(gè)亞組。
　　 2.P-Ⅲ組基因多態(tài)性分析證明，該組具有三個(gè)亞組：P-Ⅲ-1、P-Ⅲ-2和P-Ⅲ-3。本研究利用P-Ⅲ組的蛋白質(zhì)序列兩端保守性設(shè)計(jì)引物，經(jīng)RT-PCR構(gòu)建了該

4、組基因的質(zhì)粒（pUC18）文庫，并依據(jù)差異部分設(shè)計(jì)的中間引物，從文庫中篩選獲得Efp-Ⅲ-2基因。加上本實(shí)驗(yàn)室原有的Efp-Ⅲ-1和Efp-Ⅲ-3基因，序列比對(duì)證明它們是蚯蚓體內(nèi)P-Ⅲ組分基因多態(tài)性的表現(xiàn)，而且在Lumbricidae科中與蚓種無關(guān)。該結(jié)果首次報(bào)道了由一個(gè)實(shí)驗(yàn)室從一個(gè)蚓種獲得P-Ⅲ組分的三個(gè)亞組序列，從實(shí)驗(yàn)上驗(yàn)證了EST數(shù)據(jù)庫中EFE基因多態(tài)性的結(jié)論。
　　 3.本研究在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，分別將已構(gòu)建好的