1、2012年2月，有兩項(xiàng)同時(shí)發(fā)表在《Genome Research》的研究[1-2]均顯示具核梭桿菌(F.nucleatum)與炎癥性腸病、結(jié)直腸癌發(fā)生之間存在密切關(guān)聯(lián)。該研究隨后被胃腸病學(xué)與肝臟病學(xué)權(quán)威雜志《Nature Reviews Gastroenterology and Hepatology》主編Katrina Ray[3]評(píng)論為“初步確立了CRC的感染原因”，同年12月還被美國(guó)《時(shí)代》周刊盤點(diǎn)為2012年醫(yī)學(xué)十大突破之一。不僅

2、如此，這些“F.nucleatum與炎癥性腸病、結(jié)直腸癌”的相關(guān)性研究在微生物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)已引起人們的極大關(guān)注和研究興趣，使得人們把注意力從這個(gè)過去認(rèn)為的牙周相關(guān)疾病致病菌轉(zhuǎn)移到其與胃腸道疾病的相關(guān)研究之上。
　　眾所周知，炎癥性腸病是結(jié)直腸癌病因的重要高危因素[4]，目前認(rèn)為持續(xù)存在的慢性炎癥會(huì)刺激細(xì)胞不斷增生和氧化應(yīng)激，導(dǎo)致異型增生，從而發(fā)生癌變[5]。IBD的病因和發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，其中微生物感染在IBD發(fā)病中的作用

3、一直受到重視，而F.nucleatum的最新發(fā)現(xiàn)為我們提供了一個(gè)新的線索。深入研究F.nucleatum在IBD及CRC發(fā)生中的致病機(jī)理、對(duì)發(fā)展有效的IBD治療手段具有重要的理論指導(dǎo)意義，并可為將來F.nucleatum感染所致結(jié)腸癌的診斷與防治提供新的策略。
　　為此，本課題擬收集臨床結(jié)直腸癌患者癌組織和癌旁組織標(biāo)本，運(yùn)用基因芯片技術(shù)研究F.nucleatum感染相關(guān)的mRNAs和miRNAs基因表達(dá)差異，分析F.nucleat

4、um感染引起的促炎癥信號(hào)通路和癌癥信號(hào)通路變化在相關(guān)的結(jié)直腸癌腫瘤發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮的重要作用;進(jìn)一步，通過建立F.nucleatum感染腸上皮細(xì)胞模型，采用電鏡、激光共聚焦、Western blot、RT-PCR、ELISA等方法研究該菌感染在不同時(shí)間點(diǎn)所致腸上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)及自噬、凋亡，初步探索F.nucleatum感染在IBD和結(jié)直腸癌發(fā)病中的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.定量PCR檢測(cè)113例結(jié)直腸癌患者中，癌組織

5、F.nucleatum含量明顯高于癌旁組織(P=0.012)，但與患者年齡、性別，腫瘤位置、分期、轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。
　　2.基因表達(dá)譜芯片和miRNA芯片結(jié)果分析顯示，F(xiàn).nucleatum感染的結(jié)腸癌相關(guān)差異mRNA有1074個(gè)，差異miRNA有49個(gè)，主要涉及炎癥、自噬及腫瘤發(fā)生等多個(gè)信號(hào)通路的變化。
　　3.F.nucleatum感染Caco-2細(xì)胞(MOI=200∶1)，分別采用ELISA和Real-Time PCR檢

6、測(cè)不同作用時(shí)間IL-1β、IL-8和TNF-α蛋白和mRNA的表達(dá)變化，結(jié)果顯示該菌感染后無論在轉(zhuǎn)錄水平還是蛋白水平，三種炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)均比對(duì)照組顯著升高，其中感染6h后促炎細(xì)胞因子表達(dá)最高。
　　4.采用透射電鏡、激光共聚焦、Western blot檢測(cè)F.nucleatum感染Caco-2細(xì)胞的自噬，發(fā)現(xiàn)F.nucleatum能夠誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞自噬，促進(jìn)LC3B的蓄積，下調(diào)ATG16L1蛋白的表達(dá)，誘導(dǎo)促炎癥因子IL-8表

7、達(dá)升高;自噬抑制劑(Baf.A1)預(yù)處理腸上皮細(xì)胞后，再感染F.nucleatum，LC3B和促炎癥因子IL-8的表達(dá)無明顯升高。
　　5.采用透射電鏡、流式細(xì)胞術(shù)、Western blot、RT-PCR等方法發(fā)現(xiàn)F.nucleatum感染可以誘導(dǎo)部分Caco-2細(xì)胞凋亡，AKT與p-AKT水平明顯下調(diào)，而GADD34和GADD153基因轉(zhuǎn)錄水平明顯升高。
　　結(jié)論:
　　1.F.nucleatum在結(jié)腸癌組織中的含量

8、顯著高于鄰近的癌旁組織，mRNAs和miRNAs芯片篩選基因表達(dá)差異結(jié)果提示F.nucleatum可能通過調(diào)控炎癥、自噬、癌癥等信號(hào)通路參與了結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展。
　　2.F.nucleatum能誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞Caco-2促炎細(xì)胞因子IL-8、IL-1β、TNF-α明顯上調(diào)，提示這些促炎細(xì)胞因子的升高可能是其誘導(dǎo)IBD的重要因素。
　　3.F.nucleatum感染能通過抑制Atg16L1阻礙自噬體向自噬溶酶體成熟，減弱了自