1、目的：研究磁場結合阿霉素對貼壁生長的腫瘤細胞協(xié)同殺傷的細胞學機制，并進一步探究磁場造成細胞周期阻滯的可能原因。 方法： 1．采用MTT法檢測磁場、阿霉素及磁場+阿霉素對貼壁生長的腫瘤細胞(SMMC-7721、HepG-2和SW480)增殖的影響。 2．通過光學顯微鏡、原子力顯微鏡、單細胞凝膠電泳、流式細胞儀等手段，檢測磁場結合阿霉素對腫瘤細胞的協(xié)同殺傷效應。 3．采用MTT檢測、細胞同步化、免疫熒

2、光法及檢測活性氧自由基(ROS)等方法進一步研究磁場及磁場聯(lián)合阿霉素殺傷腫瘤細胞的機制。 結果： 1．(1)SMMC-7721細胞以1×10<'5> cells/mL的細胞密度接種，曝磁6h，即可對細胞生長造成顯著的抑制效應(p<0.05)；細胞以5×10<'4> cells/mL的密度接種，曝磁9h穩(wěn)恒磁場對其生長有極顯著的抑制作用(p<0.01)。(2)HepG-2細胞以1×10<'5>cells/mL和5×10

3、<'4> cells/mL的細胞密度接種，磁場處理24h，即對細胞增殖有明顯的抑制作用(p<0.01)。(3)SW480細胞分別以1×10<'5> cells/mL和5×10<'4> cells/mL的密度接種，MTT檢測發(fā)現(xiàn)：磁場分別處理36h和24h即對SW480細胞增殖造成明顯的抑制效應(p<0.01)。 2．(1)SMMC-7721細胞以1×10<'5> cells/mL的細胞密度接種，40ng/mLN霉素單獨處理細胞

4、6h可引起細胞生長抑制(p<0.05)；5ng/mL阿霉素與磁場聯(lián)合作用5h即對細胞有殺傷作用(p<0.05)；細胞接種密度為5×10<'4> cells/mL時，5ng/mL阿霉素單獨處理細胞9h可對細胞生長造成明顯的抑制效應(p<0.05)，而聯(lián)合磁場時，作用時間僅用8d,時、阿霉素濃度僅需要0.2ng/mL即對細胞有殺傷作用(p<0.05)。(2)HepG-2細胞以1×10<'5> cells/mL的細胞密度接種，10ng/mL阿

5、霉素單獨處理細胞12h即可引起細胞生長抑制(p<0.05)；聯(lián)合磁場作用時，細胞生長抑制所需的阿霉素濃度降低到1ng/mL。當細胞以5×10<'4> cells/mL的密度接種時，100ng/mL阿霉素單獨處理細胞12h可對細胞生長造成明顯的抑制效p<0.05，結合磁場共同作用時，阿霉素的濃度只需10ng/mL (p<0.05)。(3)SW480細胞以1×10<'5> cells/mL的細胞密度接種，50ng/mL阿霉素單獨處理細胞12

6、h即可引起細胞生長抑制 (p<0.05)，阿霉素聯(lián)合磁場作用時的濃度可下降到22.5ng/mL(p<0.05)；細胞低密度(5×10<'4> cells/mL)生長時，30ng/mL阿霉素單獨處理細胞12h可抑制細胞生長p<0.05，聯(lián)合磁場作用時，阿霉素的濃度可減少到5ng/mL(p<0.05)。 3．(1)HE染色結果及倒置顯微鏡觀察處理前后細胞的形態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)與對照組細胞相比，曝磁組細胞略微鼓起；阿霉素組細胞隆起、回縮，

7、貼壁性能降低；磁場+阿霉素組細胞回縮變圓，細胞邊緣粗糙，少量細胞漂浮，視野中可見細胞碎片。(2)原子力顯微鏡觀察細胞表面的微細結構，發(fā)現(xiàn)曝磁組細胞表面較為粗糙，表面有向外的隆起，且有數(shù)量增多的凹陷存在；細胞經(jīng)阿霉素處理后，表面破損并出現(xiàn)孔洞結構；當二者聯(lián)合作用時，細胞表面出現(xiàn)較大較深的不規(guī)則孔洞，且孔洞周邊隆起，表面破壞嚴重。(3)磁場、阿霉素以及磁場聯(lián)合阿霉素處理腫瘤細胞后，細胞周期分布均發(fā)生改變；不同組織來源、不同分化程度的腫瘤細胞

8、之間存在差異。SW480和SMMC-7721細胞曝磁后，G2/M期細胞比例增多；而HepG-2細胞經(jīng)磁場處理后，G1期細胞比例增加。磁場結合阿霉素處理，SMMC-7721細胞G2/M期細胞比例增多，而SW480與HepG-2細胞G1期細胞比例升高。(4)單細胞凝膠電泳檢測顯示，阿霉素處理可引起細胞DNA損傷，曝磁組細胞未檢測到DNA損傷，然而當磁場聯(lián)合阿霉素作用后，檢測到細胞DNA發(fā)生嚴重損傷，與阿霉素組相比存在極顯著差異(p<0.01

9、)。 4．(1)當SMMC-7721、HepG-2以及SW480三種腫瘤細胞以不同密度接種，磁場結合不同濃度阿霉素處理不同時間，ROS檢測得到一致實驗結果：單純磁場、單純阿霉素及磁場結合阿霉素作用細胞后，與對照組相比，ROS均有明顯增加(p<0.01)。(2)不同周期時相K562細胞，對磁場或/和阿霉素處理的敏感性存在差異，其中對磁場的敏感性排序如下：S期>G2期、M期；對阿霉素的敏感性次序稍有變化：S期>G2期>M期。(3)

10、不同周期時相cyclinB1在細胞中處于不同位置，G1期、S期時位于細胞質；G2期時開始由細胞質轉入細胞核；G2/M、M期早期時位于細胞核。經(jīng)過不同時間曝磁處理后，對照組細胞中cyclin B1定位于細胞質，細胞群體中S期細胞比例較大；實驗組中大多數(shù)細胞cyclin B1已經(jīng)轉定位于細胞核， G2/M期細胞在整個細胞群體中比例增多。 結論：通過對細胞形態(tài)、細胞周期分布及細胞DNA損傷的檢測發(fā)現(xiàn)：穩(wěn)恒磁場與阿霉素對腫瘤細胞存在協(xié)