1、Pygopus(Pygo)是近年來發(fā)現(xiàn)的Wnt信號通路的新組分。在哺乳動物中Pygo有兩個同源基因：Pygo1和Pygo2，后者的分布較為廣泛。PYGO2蛋白定位于細胞核內(nèi)，它有兩個結(jié)構(gòu)域，分別是位于C-端的PHD鋅指結(jié)構(gòu)域和位于N-端的NHD結(jié)構(gòu)域。PYGO2通過PHD結(jié)構(gòu)域與BCL9和β-catenin構(gòu)成復合體，共同促進轉(zhuǎn)錄因子TCF對Wnt靶基因的轉(zhuǎn)錄激活。Pygo2NHD結(jié)構(gòu)域的功能尚不明確，有研究者認為它具有轉(zhuǎn)錄激活作用。近

2、期研究顯示，在哺乳動物中Pygo2可能還介導Wnt非依賴性的信號轉(zhuǎn)導。 串聯(lián)親和純化技術(shù)(TAP)是在目的蛋白一端導入兩個特異性的蛋白標簽，經(jīng)過兩步親和純化，獲得在生理條件下與目的蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，隨后用質(zhì)譜技術(shù)進行鑒定。它集合了親和純化和免疫共沉淀兩種技術(shù)的優(yōu)點，可以獲得高純度、高濃度的目的蛋白復合物，簡便快捷。 本研究利用串聯(lián)親和純化和質(zhì)譜聯(lián)用的方法，從穩(wěn)定表達外源性PYGO2蛋白(帶ProtA和CBP標簽)

3、的DLD-1結(jié)腸癌細胞中，分離得到兩個與PYGO2相互作用的新蛋白：MED12(Mediatorof RNA polymerase Ⅱ transcription subunit 12)和PIK3C2A(Phosphatidylinositol-4-phosphate 3-kinase C2 domain-containing alphapolypeptide)。進一步的免疫共沉淀實驗證實，PYGO2通過NHD結(jié)構(gòu)域與MED12結(jié)合。隨