藍(lán)莓花色苷對(duì)紫外引起HepG2細(xì)胞DNA損傷保護(hù)作用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、DNA是儲(chǔ)存和傳遞遺傳信息的生物大分子,其分子的完整性對(duì)生物生命活動(dòng)至關(guān)重要。隨著現(xiàn)代社會(huì)工業(yè)化進(jìn)程的加快,臭氧層的減少會(huì)直接削弱大氣層截留太陽光中紫外線的能力,從而導(dǎo)致到達(dá)地面的紫外線明顯增加。過量的紫外輻射可引起細(xì)胞內(nèi)DNA堿基發(fā)生突變、DNA斷裂、DNA-DNA交聯(lián)、DNA-蛋白交聯(lián)以及染色體畸變等損傷,DNA損傷若不能及時(shí)修復(fù),細(xì)胞將發(fā)生癌變甚至死亡。紫外線輻射會(huì)導(dǎo)致DNA損傷,造成白內(nèi)障、皮膚光老化、癌變、免疫抑制等一系列疾病

2、的發(fā)生,尋找高效的抗氧化劑是預(yù)防和治療紫外損傷的重要手段。
  本研究對(duì)藍(lán)莓中的花色苷組分進(jìn)行分離、純化,其結(jié)構(gòu)分析結(jié)果推測(cè)藍(lán)莓在甲醇、乙醇、水三種溶劑提取后分別得到了以矢車菊素和錦葵色素;矢車菊素;矢車菊素和飛燕草素為主的花色苷成分。
  本試驗(yàn)以人肝癌HepG2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性建立了紫外輻射對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞的損傷模型。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、紫外照射組和花色苷保護(hù)組,經(jīng)紫外線照射20s人肝癌Hep

3、G2細(xì)胞,保護(hù)組在紫外線照射人肝癌HepG2細(xì)胞前預(yù)處理藍(lán)莓花色苷。用掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、Hoechst33258染色觀察細(xì)胞核形態(tài)、MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性、單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基的清除、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、激光共聚焦顯微鏡分析線粒體跨膜電位的檢測(cè)、免疫熒光法檢測(cè)γH2AX,RT-PCR檢測(cè)p53、p21、Gadd45、MDM2mRNA表達(dá)及Westernblotting檢測(cè)p53

4、、p-p53、p21、Gadd45、MDM2蛋白表達(dá)。
  結(jié)果表明,花色苷保護(hù)組可以降低紫外線造成HepG2細(xì)胞的死亡率;減少了細(xì)胞膜的囊泡,細(xì)胞形態(tài)變圓;減少細(xì)胞胞核染色質(zhì)濃縮,增加正常細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞數(shù)目;縮短彗星遷移距離,減輕細(xì)胞DNA受損程度;降低細(xì)胞內(nèi)ROS含量;減少細(xì)胞停滯在G1期的細(xì)胞數(shù)目;線粒體跨膜電位相對(duì)紫外照射組細(xì)胞升高;γH2AX焦點(diǎn)數(shù)目及熒光強(qiáng)度明顯降低;p53、p21、Gadd45、MDM2mRNA表達(dá)降

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