1、目的： 探討鋅預(yù)處理在Cr(VI)誘導(dǎo)的HepG2細胞損傷中的作用以及可能的機制。 方法： 以HepG2細胞作為Cr(VI)毒性的細胞模型，采用MTT法檢測細胞毒性，LDH活性評價細胞膜的損傷，姬姆薩染色觀察細胞形態(tài)，SDS-蛋白酶K法檢測DPC，熒光光度法分析DNA斷裂，觀察25～100umol／L劑量的Cr(VI)染毒6h對HepG2細胞的毒性、形態(tài)學(xué)改變以及DNA損傷的影響。銀飽和法檢測鋅誘導(dǎo)HepG2細胞

2、MT合成的能力。選擇80umol／L鋅預(yù)處理24h事先誘導(dǎo)MT的合成，比較鋅預(yù)處理加Cr(VI)組與單純Cr(VI)處理組細胞毒性、形態(tài)學(xué)改變和DNA損傷等檢測指標(biāo)的差異，評價鋅預(yù)處理在Cr(VI)誘導(dǎo)的細胞損傷中的作用。體外制備MT粗提組分以及放射菌素D和熱休克處理干預(yù)措施初步研究鋅預(yù)處理誘導(dǎo)的MT在Cr(VI)細胞損傷中的可能作用。 結(jié)果： 1．在25～1001xmol／L的劑量范圍內(nèi)染毒6h，Cr(VI)抑制了 H

3、epG2細胞的生長與增殖，損傷了細胞膜的完整性，促進了DPC和DNA斷裂的形成，顯微鏡下觀察可見明顯的形態(tài)學(xué)異常，細胞數(shù)量明顯減少，貼壁能力降低和折光性減弱，細胞邊界不清楚，部分細胞核皺縮，染色質(zhì)凝聚，以及少量細胞出現(xiàn)核碎裂和核溶解等病理形態(tài)學(xué)改變。Cr(VI)誘導(dǎo)的HepG2細胞損傷有明顯的劑量一效應(yīng)關(guān)系，隨染毒劑量的增加，上述改變逐漸明顯，在100umol／L Cr(VI)的作用下，可出現(xiàn)明顯的細胞壞死和凋亡。Cr(VI)能明顯的誘

4、導(dǎo)HepG2細胞的DNA損傷，其中DPC出現(xiàn)較早，變化幅度較大，是Cr(VI)誘導(dǎo)DNA損傷的重要的類型。 2．鋅能誘導(dǎo)HepG2細胞MT的合成，在50-100umol／L鋅預(yù)處理24h的劑量范圍內(nèi)與MT誘導(dǎo)合成存在一定的劑量依賴性，并且對細胞的生長與增殖無明顯影響，當(dāng)鋅在200umol／L劑量由于鋅對細胞的毒性作用可抑制MT的合成而顯著降低細胞內(nèi)MT的含量。 3．80umol／L鋅預(yù)處理24h能夠降低Cr(VI)誘導(dǎo)

5、的細胞毒性和DNA損傷作用,在25-50μmol/L的Cr(VI)劑量范圍內(nèi),鋅預(yù)處理的保護效應(yīng)較明顯,但在100μmol/LCr(VI)的作用下,鋅預(yù)處理的保護效應(yīng)基本消失。顯微鏡下觀察的鋅預(yù)處理細胞的生長方式、細胞數(shù)量和形態(tài)學(xué)異常也較單純Cr(VI)有不同程度的改善,但也主要見于25-50μmol/LCr(VI)染毒劑量組。 4.HepG2細胞用5μg/ml的放線菌素D預(yù)處理基本阻斷了鋅預(yù)處理對不同劑量Cr(VI)誘導(dǎo)的細胞

6、損傷的保護效應(yīng),細胞存活率、LDH的漏出以及DPC等細胞損傷檢測指標(biāo)與單純?nèi)綜r(VI)組無明顯差別。 5.43℃2h的熱休克處理對Cr(VI)誘導(dǎo)的細胞毒性無明顯影響,熱休克處理細胞在10～501μmol/L,Cr(VI)染毒6h的條件下存活率與相應(yīng)非熱處理細胞無明顯差異。 結(jié)論: 1.Cr(VI)對HepG2細胞具有明顯的毒性,DPC的形成是Cr(VI)誘導(dǎo)DNA損傷的重要類型,可作為較敏感的生物學(xué)效應(yīng)標(biāo)志。