1、α-半乳糖苷酶（α-galactosidase，α-D-galactoside galactohydrolase；EC3.2.1.22）也稱(chēng)蜜二糖酶，是一種外切糖苷酶，催化移除不同底物中α-連接的末端非還原性D-半乳糖。α-半乳糖苷酶在醫(yī)療、食品、化工及飼料等方面都有著廣泛的應(yīng)用前景。在飼料工業(yè)中，α-半乳糖苷酶添加劑是去除豆粕中α-半乳糖苷寡糖類(lèi)抗?fàn)I養(yǎng)因子的首選方法，但是目前飼用α-半乳糖苷酶的生產(chǎn)目前尚未形成產(chǎn)業(yè)化，其中，性質(zhì)優(yōu)良的

2、α-半乳糖苷酶的發(fā)掘是一個(gè)亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題.乳酸菌作為人們?nèi)粘Ｉ钪械氖秤锰砑泳N已有上百年的歷史了，尚未見(jiàn)任何明顯得副作用，所以我們從此入手研究產(chǎn)α-半乳糖苷酶的乳酸菌，為工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)提供一些必要的科學(xué)依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)從分離于泡菜的乳酸菌中篩選出了16株具有α-半乳糖苷酶活性的菌株，分別來(lái)源于6個(gè)不同的種。從每個(gè)種中挑選一株進(jìn)行了α-半乳糖苷酶的生化特性研究。六株菌的粗酶液均表現(xiàn)出較高的α-半乳糖苷酶活性，其中來(lái)源于

3、干酪乳桿菌g4-1最高酶活力達(dá)到了19.7 U/ml，所有α-半乳糖苷酶活性的差異明顯，都有不同的最適溫度和最適pH值。六株菌都能有效的降解棉子糖，其降解產(chǎn)酸能力與酶活性有著直接的聯(lián)系。
　　 為了進(jìn)一步克隆表達(dá)α-半乳糖苷酶基因的需要，我們挑選了g4-1作為研究對(duì)象，對(duì)其粗酶液的α-半乳糖苷酶溫度、pH的穩(wěn)定性及金屬離子Cu2+，F(xiàn)e2+，Cd2+，Ni+，Zn2+，Mg2+的影響進(jìn)行了研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明g4-1α-半乳糖苷酶

4、高溫不穩(wěn)定，酶活對(duì)pH比較敏感，在pH5以下及pH8以上α-半乳糖苷酶穩(wěn)定性較差，在pH5-8之間保存一小時(shí)，酶活均達(dá)到50％以上。大多數(shù)金屬離子對(duì)酶活性沒(méi)有很大影響，只有Ni+使酶活性降到45.27％。
　　 利用Cazy數(shù)據(jù)庫(kù)中已登錄的干酪乳桿菌的α-半乳糖苷酶的序列進(jìn)行了比對(duì)，設(shè)計(jì)了兩條特異性引物，PCR擴(kuò)增出了一條大小為2292bp的agaI基因，將該基因連接到pET-29a上，在E.coil BL21中進(jìn)行了重組表達(dá)。