1、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂或潰瘍繼發(fā)管腔內(nèi)血栓形成，是突發(fā)性心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。近年的研究顯示，炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定的主要因素。本論文以中醫(yī)“痰瘀毒”理論為指導(dǎo)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化疾病進(jìn)行探析，系統(tǒng)闡述“痰瘀毒”在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用;并在該理論指導(dǎo)下，制定DQ方，以化痰、祛瘀、解毒為治則對(duì)ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型進(jìn)行干預(yù)治療，評(píng)估其療效，以及探討抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。
　　目的:1.評(píng)估DQ方抗動(dòng)脈粥樣硬化作

2、用及機(jī)制;2.證明“痰瘀毒”在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。
　　方法:選擇8周齡雄性ApoE基因敲除小鼠60只作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后，給予含脂肪21％(wt/wt)、膽固醇0.15％(wt/wt)的“西方類型膳食”的高脂飼料喂養(yǎng)。高脂飲食4周后隨機(jī)處死5只，無菌解剖取出小鼠心臟、主動(dòng)脈根部及整條主動(dòng)脈至髂動(dòng)脈分叉處，4％多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，切片厚5um，蘇木素-尹紅染色，光鏡下確定已形成動(dòng)

3、脈硬化病變形成，繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)2周。確定動(dòng)脈粥樣硬化病變形成后隨機(jī)將小鼠平均分為4組;模型組14只、DQ方組（小劑量）14只、DQ方組（中劑量）14只、DQ方組（大劑量）14只。同時(shí)設(shè)立同品系C57BL/6J小鼠15只作為空白對(duì)照組，始終給予做普通飼養(yǎng)，正常飲食。實(shí)驗(yàn)從開始到灌胃結(jié)束，每周測(cè)一次體重并記錄。按照成人與小鼠給藥劑量換算公式計(jì)算小鼠的給藥量。DQ方按照小鼠體重灌胃給藥。各組每日量分兩次給藥，間隔時(shí)間大于6小時(shí)，連續(xù)灌胃30

4、天。每周根據(jù)體重變化調(diào)整藥量。30天后停止灌胃，藥物干預(yù)結(jié)束。取材前24h禁食不禁水，ApoE基因敲除雄性小鼠稱重后計(jì)算麻醉藥物劑量經(jīng)4％水合氯醛(0.1ml/10g)腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血，處死動(dòng)物，取出心臟和主動(dòng)脈，予以固定。參照Suzuki等確立的方法，每只小鼠的主動(dòng)脈根部留取4個(gè)相同界面切片，相鄰切片分別行HE染色以及免疫組織化學(xué)染色。鏡下觀察以下內(nèi)容:1.主動(dòng)脈根部斑塊形態(tài)結(jié)構(gòu)及其內(nèi)部成分，重點(diǎn)觀察斑塊大小、斑塊內(nèi)脂質(zhì)核大小、

5、纖維帽情況，IPP6.0圖像分析軟件測(cè)量斑塊面積、斑塊內(nèi)細(xì)胞外脂質(zhì)含量，對(duì)病理形態(tài)變化予以分析。2.酶聯(lián)夾心法測(cè)血清TC、ox-LDL、Visfatin水平;3.免疫組化方法測(cè)主動(dòng)脈根部斑塊內(nèi)NF-κ Bp65、CD68表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1.ApoE基因缺陷小鼠高脂飼料喂養(yǎng)4周，在主動(dòng)脈根部可形成明顯的斑塊:斑塊脂核大且纖維帽薄、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。2.灌胃前、造模期間，模型組、治療組體重較空白對(duì)照組明顯升高(P＜0.05);灌胃前

6、-后治療組體重下降比模型組明顯。模型組小鼠毛色普遍缺乏光澤度，活動(dòng)較差，精神萎靡，排泄尚正常。DQ方高劑量組、DQ方中劑量組、DQ方低劑量組小鼠的活動(dòng)度、皮毛光澤、精神狀態(tài)較模型組有所改善。3.模型組與治療組血清TC、ox-LD均明顯升高(P＜0.05);治療組TC、ox-LD較模型組下降(P＜0.05);DQ方高、中、低劑量組組間無明顯差異(P＞0.05)。4.模型組小鼠血清Visfatin含量較空白對(duì)照組明顯升高(P＜0.01);治

7、療組血清Visfatin含量低于模型組(P＜0.05)。5.HE染色光鏡下觀察各組切片:空白組小鼠主動(dòng)脈根部無斑塊形成，內(nèi)膜光滑。與空白組比較，模型組小鼠主動(dòng)脈根部形成成熟的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，細(xì)胞外脂質(zhì)核心形成，顯示為針尖、柳葉、結(jié)晶狀的白色空隙或融合的白色團(tuán)塊。模型組、治療組組間斑塊面積大小無顯著差異(P＞0.05)。與模型組比較，DQ方中劑量組與DQ方低劑量組斑塊內(nèi)的細(xì)胞外脂質(zhì)面積減少(P＜0.05);DQ方高劑量組與模型組比較，細(xì)

8、胞外脂質(zhì)面積差異(P＞0.05)。6.與模型組比較，治療組NF-κ Bp65表達(dá)下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);各治療組組間NF-κ Bp65陽性表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。7.空白組小鼠主動(dòng)脈根部無CD68陽性表達(dá)。與正常組比較，模型組小鼠斑塊局部CD68表達(dá)顯示升高。與模型組比較，DQ方高劑量組、DQ方中劑量組與DQ方低劑量組表達(dá)明顯減低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。DQ方高劑量組、DQ方中劑量組與DQ方低劑量組組間CD6