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![Nogo下游結(jié)合分子的鑒定及Nogo與BEX1結(jié)合的功能研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/e5484851-d6d1-4c13-9dd1-70fefb7c6ccd/e5484851-d6d1-4c13-9dd1-70fefb7c6ccd1.gif)
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文檔簡介
1、本研究以Nogo-66為誘餌蛋白,酵母雙雜交篩選人腦cDNA文庫,獲得了BEX1、Clusterin等候選結(jié)合蛋白。通過半乳糖苷酶檢測和免疫共沉淀,證明了:Clusterin能與Nogo-B發(fā)生體外結(jié)合;BEX1 與Nogo-A、Nogo-B均能結(jié)合,且能與p75NTR形成復(fù)合物。 將Nogo-B與BEX1、Clusterin和Necdin質(zhì)粒瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后行流式細(xì)胞檢測,證明BEX1、clusterin以及Necdin
2、均可降低由Nogo-B引起的細(xì)胞調(diào)亡,且BEX1的抗凋亡效應(yīng)明顯高于clusterin和Necdin。將Nogo-B與BEX1共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,通過Hoechst核染色方法進(jìn)行凋亡細(xì)胞形態(tài)分析發(fā)現(xiàn),Nogo-B能夠?qū)EX1由核分布為主轉(zhuǎn)變?yōu)橐园麧{分布為主,同時(shí)發(fā)生轉(zhuǎn)位的絕大部分細(xì)胞Hoechst染色都呈現(xiàn)凋亡表型。 將Nogo-A、Nogo-B、對照質(zhì)粒分別與等量GFP-BEX1質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)和West
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