1、本論文分兩個部分，分別研究了作為細胞信號通路調(diào)節(jié)基因的PP20c和作為化學小分子代謝相關(guān)基因的HSDL2的初步生物學功能。 蛋白質(zhì)的磷酸化／去磷酸化作用是調(diào)節(jié)真核細胞內(nèi)活動的一種重要方式，在細胞信號傳導、細胞周期調(diào)控等許多過程中都起到至關(guān)重要的作用。我們從人胎腦cDNA文庫中克隆到一個新的蛋白磷酸酶基因，PP2Cκ，其cDNA全長2034bp，編碼一個372個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，該蛋白具有一個完整的蛋白磷酸酶2C催化結(jié)構(gòu)域，屬

2、于絲蘇氨酸磷酸酶中的PP2C亞家族。PP2Cκ基因定位于人染色體4q21-22，由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成。逆轉(zhuǎn)錄PCR顯示，該基因廣泛的表達于所有我們檢測的正常成人和胎兒組織，在成人腦、卵巢、心臟、胰腺、腎組織和胎兒心臟、胸腺等組織表達量相對較高。原核表達的PP2Cκ蛋白對磷酸化的蘇氨酸多肽具有去酸磷化的絲蘇氨酸磷酸酶活性。瞬時轉(zhuǎn)染AD293細胞，發(fā)現(xiàn)PP2Cκ蛋白集中定位于細胞核內(nèi)。PP2Cκ過量表達能夠顯著激活細胞內(nèi)的熱休克轉(zhuǎn)錄

3、因子通路。我們通過進一步分析發(fā)現(xiàn)，PP2Cκ對熱休克轉(zhuǎn)錄因子通路的激活，很可能是通過直接與熱休克轉(zhuǎn)錄因子相互作用來實現(xiàn)的，PP2Cκ和熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)在細胞核內(nèi)呈共定位分布，體外相互作用實驗證明二者有一定的結(jié)合能力。這為研究細胞熱休克調(diào)控通路提供了一個新的研究方向。我們還利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選可能與PP2Cκ有相互作用的蛋白，研究這些候選蛋白與PP2C~c是否真的存在有相互作用，能夠進一步揭示PP2Cκ這個廣譜表達的絲蘇氨酸

4、磷酸酶在細胞內(nèi)的生物學功能。 類固醇脫氫酶參與體內(nèi)固醇類物質(zhì)代謝的反應，對哺乳動物的生長與發(fā)育起到了極為重要的作用。通過對人胎腦cDNA文庫的大規(guī)模的序列分析，我們克隆到一條類似類固醇脫氫酶的cDNA，命名為HSDL2。該cDNA全長3211bp，編碼一個418氨基酸的多肽。該蛋白包含了一個短鏈脫氫酶催化結(jié)構(gòu)域以及一個固醇載體蛋白家族的SCP-2結(jié)構(gòu)域，而且包含有短鏈脫氫酶家族典型的NAD(P)+輔酶結(jié)合位點(TGxxxGxG

5、)及酶活性位點(S-Y-K)等保守基序。蛋白質(zhì)序列分析表明HSDL2蛋白與小鼠及果蠅中的同源蛋白具有較高的相似性。該基因定位于人9號染色體長臂的32區(qū)，包含了n個外顯子。逆轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)果則顯示該蛋白在人主要組織中廣泛表達，尤其在肝、腎、前列腺、睪丸和卵巢中表達量很高。原核表達的HSDL2融合蛋白具有與輔酶NADPH結(jié)合的能力。細胞內(nèi)綠熒光定位實驗顯示，該蛋白定位于細胞質(zhì)中。細胞中過表達含有SCP2結(jié)構(gòu)域膽固醇的HSDL2，發(fā)現(xiàn)細胞總膽固